大分子物質(zhì)的水解反應(yīng)

大分子淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能被生物直接利用，大分子物質(zhì)必須被產(chǎn)生的胞外酶分解后才能被微生物吸收利用。只要胞外酶是水解酶，就可以通過加水把大的物質(zhì)分裂成更小的化合物，運輸?shù)郊?xì)胞中。

淀粉酶將淀粉水解成糊精、二糖和單糖。脂肪酶將脂肪水解成甘油和脂肪酸；蛋白酶將蛋白質(zhì)水解成氨基酸。這些過程可以通過觀察細(xì)菌菌落周圍物質(zhì)的變化來證實。淀粉暴露在碘溶液中會產(chǎn)生藍(lán)色，但用碘測細(xì)菌水解淀粉的區(qū)域不會產(chǎn)生藍(lán)色，說明細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶。脂肪水解后產(chǎn)生的脂肪酸可以改變培養(yǎng)基的酸堿度，降低培養(yǎng)基的酸堿度。添加到培養(yǎng)基中的中性紅色指示劑會使培養(yǎng)基由淺紅色變?yōu)樯罴t色，表明細(xì)胞外存在脂肪酶。

糖發(fā)酵試驗

糖發(fā)酵試驗是一種常用的鑒定微生物的生化反應(yīng)，尤其在腸道細(xì)菌的鑒定中。大多數(shù)細(xì)菌可以利用碳水化合物作為碳源和能源，但它們分解碳水化合物的能力差異很大。有些細(xì)菌可以分解某些糖類產(chǎn)生有機酸(如乳糖、乙酸、丙酸等)。)和氣體(如氫氣、甲烷、二氧化碳等。);有些細(xì)菌只產(chǎn)生酸，不產(chǎn)生氣體。比如大腸桿菌可以分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)生酸和氣體；傷寒桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生酸而不產(chǎn)生氣體，不能分解乳糖；普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生酸和氣體，但不能分解乳糖。

發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨、指示劑(溴甲酚紫)、倒置韓德小管和不同的糖。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)生酸時，溴甲酚紫指示劑可由紫色(pH6.8)變?yōu)辄S色(pH5.2)。氣體的產(chǎn)生可以通過倒置韓德小管中氣泡的存在或不存在來證明。

IMViC反應(yīng)

IMViC反應(yīng)是吲哚試驗、甲基紅試驗、伏安試驗和檸檬酸試驗的縮寫。這四個實驗主要用于快速鑒定大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌，多用于水的細(xì)菌檢驗。

吲哚試驗:有些細(xì)菌用氨酶染色，可以分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚(靛藍(lán)基質(zhì))。吲哚能與對二甲氨基苯甲醛反應(yīng)生成玫瑰吲哚，呈紅色。

甲基紅試驗:在葡萄糖代謝過程中，一些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步分解為甲酸、乙酸、琥珀酸等。，使培養(yǎng)基的酸堿度降至4.5以下，加入甲基紅指示劑后會變紅。如果細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生的酸較少，或者生成的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)(如醇、醛、酮、氣體、水)，培養(yǎng)基的pH在5.4以上，加入甲基紅指示劑呈橙色。這種試驗常與V-P試驗一起使用，因為前者對細(xì)菌呈陽性，而后者通常呈陰性。

伏安法(雙乙酰)試驗:部分細(xì)菌可轉(zhuǎn)化如下:葡萄糖→丙酮酸(脫羧)→乙酰甲基甲醇→ 2，3-丁烯二醇，在堿存在下氧化成雙乙酰，后者與蛋白胨中的胍類化合物反應(yīng)生成粉紅色化合物。本實驗的目的是確定細(xì)菌產(chǎn)生乙酰甲基甲醇的能力。

檸檬酸試驗:當(dāng)細(xì)菌以銨鹽為唯一氮源，檸檬酸鹽為唯一碳源時，如果細(xì)菌能以這些鹽為氮源和碳源生長，就可以用檸檬酸鈉生成碳酸鹽，碳酸鹽會與銨鹽生成的氨反應(yīng)生成NH4OH，從而使培養(yǎng)基呈堿性，指示劑溴百里酚藍(lán)(BTB)由淡綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。

生化反應(yīng)種類繁多，操作復(fù)雜，過程繁瑣，耗時長。目前市場上已經(jīng)出現(xiàn)了生理生化反應(yīng)試劑盒，但是市場上的試劑盒產(chǎn)品質(zhì)量難以保證。那么如何選擇質(zhì)量高、操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確的鑒定試劑盒呢？

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一張生化身份證上有12或24個生化檢驗。細(xì)菌試驗包括IMViC試驗:吲哚(I)、甲基紅(M)、VP(V)、檸檬酸利用(C)，常用于鑒別腸桿菌，統(tǒng)稱IMViC試驗、碳水化合物代謝試驗、氨基酸代謝試驗、苯丙氨酸脫氨酶試驗。

尿素代謝實驗(脲酶實驗)、丙二酸代謝實驗、ONPG實驗(β-半乳糖苷酶實驗)

，葡萄糖醛酸酶檢測實驗，硝酸鹽還原實驗，葉琳水解實驗，硫化氫產(chǎn)生實驗，運動檢測實驗，過氧化氫酶實驗(觸酶實驗)，氧化酶實驗，耐鹽實驗，吡咯烷酮酶實驗(PYR實驗)，堿性磷酸酶實驗。

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