Cas9首先與crRNA和tracrRNA結(jié)合形成復(fù)合物，再與PAM序列結(jié)合侵入DNA形成RNA-DNA復(fù)合物結(jié)構(gòu)，然后切割靶DNA雙鏈?zhǔn)笵NA雙鏈斷裂，從而達(dá)到基因敲除的作用。
本文通過(guò)基因工程對(duì)crRNA和tracrRNA進(jìn)行修飾，將它們連接在一起得到sgRNA。融合RNA的活性與野生型RNA相似，但結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)化，更便于研究者廣泛使用。通過(guò)將最初表達(dá)的sgRNA與最初表達(dá)的Cas9連接，可以獲得表達(dá)兩者的質(zhì)粒，并且可以通過(guò)將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中來(lái)操縱靶基因。
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