質(zhì)粒圖譜是質(zhì)粒DNA序列的物理圖譜，提供包括質(zhì)粒大小、篩選標(biāo)記、克隆位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄和翻譯元件等信息。它為我們選擇質(zhì)粒、了解質(zhì)粒的特性和應(yīng)用提供了重要的依據(jù)。

如何閱讀質(zhì)粒圖譜？

各種英文字母的含義是什么？

我們需要了解哪些信息？

今天我教你快速掌握質(zhì)粒圖譜的四個(gè)步驟。

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了解質(zhì)粒圖譜的四個(gè)要點(diǎn)↓ⅵ

復(fù)制起點(diǎn)，它控制著質(zhì)粒的復(fù)制，并決定了質(zhì)粒的宿主和拷貝數(shù)。篩選標(biāo)記，了解篩選標(biāo)記類型，方便后續(xù)確定篩選重組質(zhì)粒載體的方法。多克隆位點(diǎn)，既外源基因的插入位點(diǎn)。其他元件，如轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、翻譯表達(dá)元件和蛋白標(biāo)簽等。

理解質(zhì)粒圖譜中復(fù)制的起源

圖中Ori表示質(zhì)粒復(fù)制的起點(diǎn)。質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)決定了質(zhì)粒的宿主與質(zhì)粒的拷貝數(shù)有關(guān)。是質(zhì)粒中的特異序列，富含AT和重復(fù)序列。

提示:

圖譜上只有一個(gè)ori，表示質(zhì)粒是原核克隆及表達(dá)質(zhì)粒圖譜上有兩個(gè)ori，則表示該質(zhì)粒是穿梭質(zhì)粒，既可以在原核也可以在真核中復(fù)制

理解質(zhì)粒圖譜中的篩選標(biāo)記

圖譜中的AmpR、KanaR等代表質(zhì)粒載體中的篩選標(biāo)記，多為抗生素抗性基因，便于后續(xù)抗生素篩選陽性克隆。特點(diǎn)是單詞以大寫r或上標(biāo)r結(jié)尾。

提示:

只在一種宿主中復(fù)制的質(zhì)粒僅具有一種抗性篩選標(biāo)記，如原核克隆載體和原核表達(dá)載體能夠在兩種類型宿主中復(fù)制和表達(dá)的載體會(huì)具有兩種篩選標(biāo)記，如穿梭質(zhì)粒

第三步:了解質(zhì)粒圖譜中的多個(gè)克隆位點(diǎn)

圖譜中的MCS或排列有許多核酸內(nèi)切酶的部分是質(zhì)粒的多重克隆位點(diǎn)。多克隆位點(diǎn)是一系列限制性內(nèi)切酶消化位點(diǎn)，是外源DNA的插入位點(diǎn)。一般外源DNA可以通過消化/連接的方式插入質(zhì)粒。

提示:

位于轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)和轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)之間所包含的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)數(shù)量和組成因載體不同會(huì)有所差異其中的酶切位點(diǎn)在質(zhì)粒中為單一的酶切位點(diǎn)使用時(shí)需注意質(zhì)粒載體與外源DNA酶切位點(diǎn)的兼容性問題

步驟4:查看質(zhì)粒圖譜中還有哪些有用的信息

除了復(fù)制起始位點(diǎn)、篩選標(biāo)記和多重克隆位點(diǎn)，質(zhì)粒載體還具有一些其他的表達(dá)或調(diào)控元件，如轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、翻譯調(diào)控元件和融合表達(dá)標(biāo)簽蛋白。

蛋白純化標(biāo)簽蛋白：His-Tag，GST-tag等蛋白檢測標(biāo)簽蛋白：Myc-Tag，F(xiàn)lag-Tag，HA-Taq等熒光蛋白表達(dá)標(biāo)簽：GFP，mCherry等

這里質(zhì)粒圖譜的培養(yǎng)已經(jīng)基本完成~ ~

來源:微信官方賬號(hào)“天根”(微信號(hào):天根_生技)

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