弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)是一種可以感染的專(zhuān)業(yè)細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng)，包括特異性宿主、幾乎所有動(dòng)物和人-機(jī)體內(nèi)的各種核細(xì)胞，人和動(dòng)物的感染率都很高。

豬暴發(fā)弓形蟲(chóng)?。╰oxoplasmosis）時(shí)，可使整個(gè)豬場(chǎng)發(fā)病，病死率高達(dá)60%以上，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響?zhàn)B殖業(yè)的發(fā)展。豬弓形蟲(chóng)病與公共衛(wèi)生有著密切關(guān)系，豬肉是人們生活中最主要的動(dòng)物源性食品，弓形蟲(chóng)感染的豬及其肉制品是人類(lèi)感染弓形蟲(chóng)的一個(gè)重要傳染源，對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成極大的威脅。

1 病原學(xué)特征

1908年由Nicolle和Manceaux在北非突尼斯的嚙齒類(lèi)梳趾鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)弓形蟲(chóng)這一病原體，并正式命名。剛地弓形蟲(chóng)（Toxoplasma gondii，T.gondii）簡(jiǎn)稱(chēng)弓形蟲(chóng)，屬于頂復(fù)門(mén)（Apicomplexa）、孢子蟲(chóng)綱（Sporozoasida）、真球蟲(chóng)目（Eucocciida）、肉孢子蟲(chóng)科（Sarcocystidae）、弓形蟲(chóng)屬（Toxoplasma）。目前，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為弓形蟲(chóng)只有一個(gè)種，一個(gè)血清型，但有不同的蟲(chóng)株。

弓形蟲(chóng)的有性繁殖發(fā)生在終末宿主貓科動(dòng)物小腸上皮細(xì)胞，無(wú)性繁殖發(fā)生在中間宿主溫血?jiǎng)游锍t細(xì)胞外的有核細(xì)胞。弓形蟲(chóng)發(fā)育全過(guò)程一般包括滋養(yǎng)體（又稱(chēng)速殖子）、包囊、裂殖體、配子體和卵囊5種形態(tài)，分別在中間宿主和終末宿主體內(nèi)完成。速殖子呈弓形、月牙形或香蕉形，一端偏尖，另一端偏鈍圓，平均大小為（4～7）μm×（2～4）μm。卵囊見(jiàn)于貓科動(dòng)物，呈橢圓形，大小為（11～14）μm×（7～11）μm。包囊呈卵圓形或橢圓形，直徑5～100μm。

貓吞食了弓形蟲(chóng)的包囊或卵囊，蟲(chóng)體釋放出來(lái)，一部分經(jīng)淋巴和血液循環(huán)被帶到全身各臟器和組織中，侵入有核細(xì)胞，另一部分蟲(chóng)體在小腸上皮細(xì)胞進(jìn)行類(lèi)似球蟲(chóng)發(fā)育的裂殖生殖和配子生殖，產(chǎn)生卵囊。卵囊隨糞便排出，在外界發(fā)育為具有感染性的孢子化卵囊。中間宿主食入或飲入被孢子化卵囊污染的食物和水源后，孢子化卵囊釋放出子孢子，經(jīng)淋巴和血液進(jìn)入組織器官，侵入有核細(xì)胞而形成感染。如果感染的蟲(chóng)株毒力很強(qiáng)，而且宿主又未能產(chǎn)生足夠的免疫力，即可引起弓形蟲(chóng)病的急性發(fā)作；反之，如果蟲(chóng)株的毒力弱，宿主又能很快產(chǎn)生免疫力，蟲(chóng)體轉(zhuǎn)入慢殖子階段，在包囊內(nèi)緩慢增殖，形成持續(xù)感染。

2 流行病學(xué)特征

弓形蟲(chóng)病是一種世界性流行的人畜共患病，動(dòng)物和人的感染均極普遍，至少有200種哺乳動(dòng)物感染。感染源主要是病人、病畜和帶蟲(chóng)動(dòng)物，其中血液、肉、內(nèi)臟等都可能有弓形蟲(chóng)。乳汁、唾液、痰、尿和鼻等分泌物中含有弓形蟲(chóng)；流產(chǎn)胎兒體內(nèi)、胎盤(pán)和羊水中均有大量的弓形蟲(chóng)的存在。該病感染率沒(méi)有嚴(yán)格的地區(qū)和季節(jié)性分布，但秋冬季節(jié)和早春發(fā)病率最高，可能與動(dòng)物機(jī)體的抵抗力有關(guān)。全世界每年約有十幾億人感染弓形蟲(chóng)病，其感染率與當(dāng)?shù)鼐用竦奈幕?、飲食?xí)慣等有關(guān)，國(guó)外人群感染率為0.6%～94%，平均為25%～58%，其中歐美地區(qū)弓形蟲(chóng)感染率較高，法國(guó)是流行最嚴(yán)重的國(guó)家，感染率為80%～90%；荷蘭人群感染率也較高，達(dá)40%；非洲和拉丁美洲的感染率也較高；東南亞、北美洲和大洋洲的感染率則較低。我國(guó)弓形蟲(chóng)的發(fā)現(xiàn)在亞洲是較早的。新中國(guó)成立前我國(guó)無(wú)弓形蟲(chóng)病報(bào)道。1964年謝天華在江西首次報(bào)道了人弓形蟲(chóng)病。我國(guó)幾乎每個(gè)省份都有人弓形蟲(chóng)病的報(bào)道，感染率為0.09%～34%，平均感染率為7.88%，各種年齡階段的人均可感染，少數(shù)民族地區(qū)感染率可能更高，雖然我國(guó)人群弓形蟲(chóng)感染率低于世界平均水平，但呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)。

弓形蟲(chóng)在家畜中流行很普遍，豬、羊、牛、馬等均可感染，對(duì)豬的危害最大，國(guó)外報(bào)道，該病多在3～4月齡的仔豬中發(fā)生，其癥狀與豬瘟類(lèi)似，病死率可高達(dá)30%～40%，其中以乳豬病死率最高，而成年豬發(fā)病較少，多數(shù)呈隱性感染或出現(xiàn)輕微的癥狀。1955年于恩庶等首先在福建從貓、豬等動(dòng)物體內(nèi)分離出弓形蟲(chóng)，1977年吳碩顯在上海首次從“無(wú)名高熱”豬體內(nèi)分離出弓形蟲(chóng)，證明我國(guó)存在豬弓形蟲(chóng)病的暴發(fā)流行。我國(guó)豬弓形蟲(chóng)的感染率為4%～71.4%，不同品種、年齡和性別的豬都可發(fā)病，7～9月齡發(fā)病較多，以25kg以上的育肥豬發(fā)病率最高，豬月齡對(duì)感染率高低沒(méi)有一定的規(guī)律性，而性別差異較大，母豬感染率為36.4%，公豬感染率為29.4%，根據(jù)流行形式可分為暴發(fā)型、急性型、零星散發(fā)和隱性感染。

我國(guó)其他動(dòng)物的弓形蟲(chóng)感染也非常普遍，貓的感染率為15%～73%，犬的感染率為3%～33%，羊的感染率為10%～50%，牛的感染率為0.2%～43.3%。家禽也有弓形蟲(chóng)的感染，雞、鴨、鵝的感染率分別是15.69%、3.84%和16.54%。

3 危害

免疫力正常的人感染弓形蟲(chóng)后通常呈隱性感染，一般無(wú)明顯臨床癥狀，一旦機(jī)體免疫力下降或免疫功能缺陷者感染后，可引起全身反應(yīng)和多器官受損，嚴(yán)重時(shí)造成死亡。妊娠期間感染弓形蟲(chóng)可引起流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎，弓形蟲(chóng)可通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒，造成胎兒先天性感染。胎兒出生后表現(xiàn)為一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀及眼、內(nèi)臟的先天損害。有些新生兒出生時(shí)無(wú)特殊體征，僅表現(xiàn)為低體重、貧血、黃疸等，但逐漸出現(xiàn)抽搐、腦膜炎及癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)病變，可引起智力發(fā)育障礙。

動(dòng)物感染弓形蟲(chóng)后表現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢，飼料利用率下降，生產(chǎn)性能低下，長(zhǎng)期帶蟲(chóng)，嚴(yán)重時(shí)死亡；造成繁殖動(dòng)物生產(chǎn)異常，流產(chǎn)、死胎，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。其中危害最嚴(yán)重的是豬。目前，我國(guó)豬弓形蟲(chóng)病分布十分廣泛，華北、華東、東北、華中、華南、西南、西北等地區(qū)均有該病發(fā)生的報(bào)道，感染率和病死率普遍較高。豬肉是人們生活中最主要的動(dòng)物源性食品，弓形蟲(chóng)感染的豬及其肉制品對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成極大的威脅。感染弓形蟲(chóng)的豬通常沒(méi)有明顯的臨床癥狀，但事實(shí)上隱性感染豬的組織內(nèi)可能含有弓形蟲(chóng)的包囊，如果烹飪時(shí)加工不當(dāng)或者由于個(gè)人習(xí)慣（如喜食不熟或生肉），則可能引發(fā)人的弓形蟲(chóng)感染。

Mendonca等用PCR技術(shù)擴(kuò)增經(jīng)處理的豬肉香腸樣品，同時(shí)以處理的豬肉香腸樣品進(jìn)行小鼠動(dòng)物試驗(yàn)，以IFA檢測(cè)小鼠血清中的特異性抗弓形蟲(chóng)抗體，結(jié)果PCR的檢出率為47.14%（33/70），小鼠血清為陰性，雖然結(jié)果表明豬肉香腸樣品中不含有活的弓形蟲(chóng)，但PCR檢出率高也能說(shuō)明豬肉香腸受弓形蟲(chóng)污染較嚴(yán)重。如果香腸在加工過(guò)程中食鹽濃度＜3.0%，鹽漬時(shí)間＜3d，則不能有效殺死香腸中弓形蟲(chóng)包囊或速殖子。韓國(guó)于1997年暴發(fā)的2起共8人食源性急性弓形蟲(chóng)病均因食用未加熱透徹的（野）豬的脾和肝引起。Dias等調(diào)查巴西隆德里納市47份屠宰工人血清和149份（8個(gè)廠家）新鮮豬肉香腸進(jìn)行小鼠生物學(xué)試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清陽(yáng)性率分別為59.6%（28/47）和8.7%（13/149），認(rèn)為新鮮豬肉香腸在弓形蟲(chóng)病傳播中有重要作用。

4 診斷技術(shù)

根據(jù)臨床癥狀、病理變化和流行病學(xué)做出初步診斷，確診必須在實(shí)驗(yàn)室中查出病原體或特異性抗體，主要方法有病原學(xué)檢查、血清學(xué)檢測(cè)和分子生物學(xué)診斷。

4.1 病原學(xué)檢查

4.1.1 直接涂片

取血液、血清、腹水或肝、肺、淋巴結(jié)等病料直接涂片吉姆薩或瑞氏染液染色，鏡檢，發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)體可確診。此法診斷弓形蟲(chóng)病非常準(zhǔn)確，但檢出率低，易漏檢。

4.1.2 組織切片染色法

對(duì)病變組織進(jìn)行冷凍切片，用免疫酶或熒光染色，不僅可以使包囊著色，還可以使散在的弓形蟲(chóng)速殖子及被染細(xì)胞內(nèi)蟲(chóng)體著色，此法靈敏度高，特異性強(qiáng)，可提高蟲(chóng)體的檢出率。

4.1.3 動(dòng)物接種分離法和細(xì)胞培養(yǎng)法

將肝、肺、淋巴結(jié)等病料勻漿后，加5～10倍生理鹽水混勻，過(guò)濾，離心，取上清液腹腔接種于易感動(dòng)物小鼠，觀察發(fā)病情況，可盲傳幾代，以提高檢出率。這種方法有很強(qiáng)的敏感性和特異性，但是比較耗費(fèi)時(shí)間。亦可將上述病料接種于離體培養(yǎng)的單層有核細(xì)胞中，細(xì)胞培養(yǎng)相比動(dòng)物接種來(lái)說(shuō)，敏感性低，但所需時(shí)間短。

4.1.4 卵囊檢查法

將糞便用飽和氯化鈉或蔗糖溶液（30%）漂浮，收集卵囊鏡檢，但檢出率一般較低。

4.2 血清學(xué)檢測(cè)

血清學(xué)檢測(cè)由于快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)，已成為目前應(yīng)用廣泛、發(fā)展快速的檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染的方法。主要方法包括：染色試驗(yàn)、間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)、ELISA、間接免疫熒光試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和免疫膠體金技術(shù)等。

4.2.1 染色試驗(yàn)（DT）

弓形蟲(chóng)速殖子、補(bǔ)體輔助因子和待檢血清一起置37℃孵育1h，然后以亞甲藍(lán)染色，當(dāng)有特異性抗體存在時(shí)，寄生蟲(chóng)膜通透性增加，胞質(zhì)流出，速殖子不能與染料結(jié)合而呈無(wú)色；當(dāng)無(wú)特異性抗體存在時(shí)，速殖子能吸附染料而呈藍(lán)色。該方法為經(jīng)典的弓形蟲(chóng)病血清學(xué)檢測(cè)，具有良好的特異性、敏感性和重復(fù)性。但該方法由于在檢查時(shí)必須使用活的、有毒力的速殖子而存在巨大的危險(xiǎn)性，應(yīng)用受到一定的限制。

4.2.2 間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（IHAT）

將速殖子可溶性抗原吸附于紅細(xì)胞表面，再與相應(yīng)的抗體發(fā)生反應(yīng)，通過(guò)抗原與抗體的特異性反應(yīng)，使紅細(xì)胞間接凝集。Jacob和Lunde于1957年首先將該法應(yīng)用于弓形蟲(chóng)病檢測(cè)。我國(guó)于恩庶于1979年將IHAT應(yīng)用于豬弓形蟲(chóng)病的檢測(cè)。1982年，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所研制出IHAT診斷試劑盒。Wilson等應(yīng)用ELISA、IHAT和IFAT三種試劑盒，對(duì)100份血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)以后認(rèn)為，IHAT對(duì)急性感染早期血清缺乏敏感性。崔兆君等認(rèn)為IHAT特異性高、假陽(yáng)性率低、診斷價(jià)值高和操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是敏感性不如ELISA，重復(fù)性較差，致敏紅細(xì)胞不穩(wěn)定，陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)帶有一定的主觀性。

4.2.3 ELISA

用速殖子可溶性抗原包被酶標(biāo)板，加入待檢血清，再滴加酶標(biāo)記的二抗（如辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗綿羊IgG），利用酶的催化作用和底物放大反應(yīng)原理，對(duì)待檢抗體進(jìn)行定性和定量分析。1976年，Voller等首次將該方法應(yīng)用于檢測(cè)弓形蟲(chóng)特異性抗原，獲得與DT和IHAT良好的符合率，且敏感性強(qiáng)。Peter等用弓形蟲(chóng)速殖子粗體抗原建立間接ELISA檢測(cè)豬弓形蟲(chóng)病，以DT方法做比較，結(jié)果間接ELISA的敏感性和特異性都為94%。

近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，重組抗原取代天然抗原作為診斷抗原，省去抗原制備的繁瑣過(guò)程，從而達(dá)到經(jīng)濟(jì)、特異和安全的目的。Redlich等用表達(dá)的融合蛋白GRA6-GST建立ELISA，其敏感性可達(dá)98%；Aubert等將重組的棒狀體蛋白1（ROP1）、表面抗原蛋白（P25和P35）混合建立ELISA，用于弓形蟲(chóng)IgM的檢測(cè)，其敏感性、特異性及符合率分別為93.1%、95.0%和94.5%，可用于弓形蟲(chóng)早期診斷；Huang等以表面蛋白P22（SAG2）建立ELISA，與IHAT做比較，發(fā)現(xiàn)該方法特異性強(qiáng)、敏感性高。國(guó)內(nèi)呂斌等以重組的P35-GST建立了檢測(cè)人血清的IgM的ELISA，該方法能區(qū)分弓形蟲(chóng)病的急性感染和慢性感染。張東林等建立了可檢測(cè)多種動(dòng)物弓形蟲(chóng)抗體的AG-ELISA，檢測(cè)了人工感染的豬和自然感染的4種動(dòng)物（豬、牛、貓和犬）的血清中抗弓形蟲(chóng)抗體，表明AG-ELISA陽(yáng)性檢出的時(shí)間比改良凝集試驗(yàn)方法早，其檢出率、敏感性及準(zhǔn)確度等均優(yōu)于乳膠凝集試驗(yàn)。

總之，該方法操作易自動(dòng)化，具有高度特異性和敏感性，結(jié)果可定量，適于批量樣品的檢測(cè)，有很好的推廣應(yīng)用價(jià)值。

4.2.4 間接熒光抗體試驗(yàn)（IFAT）

以速殖子為抗原，與被檢稀釋血清一起孵育，加入熒光素（異硫氰酸熒光素）標(biāo)記的二抗，在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。Miller等采用此法檢測(cè)經(jīng)免疫組化和病原學(xué)分離的28例陽(yáng)性和46例陰性者的血清，發(fā)現(xiàn)其敏感性和特異性分別為96.4%和67.3%。該方法用于弓形蟲(chóng)早期感染中IgM和IgG抗體檢測(cè)，具有較高敏感性、特異性和重現(xiàn)性等優(yōu)點(diǎn)，但類(lèi)風(fēng)濕因子可引起IgM抗體的假陽(yáng)性反應(yīng)。因試驗(yàn)需要熒光顯微鏡觀察，限制了該法的廣泛使用。

4.2.5 免疫膠體金技術(shù)（ICT）

ICT是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。王艷華等建立ICT檢測(cè)弓形蟲(chóng)血清，并與IHAT做比較，結(jié)果符合率為82.5%，ICT比IHAT能提前2d檢測(cè)到弓形蟲(chóng)抗體，說(shuō)明ICT的敏感度高于IHAT。日本帶廣畜產(chǎn)大學(xué)以重組SAG2抗原建立快速免疫層析試驗(yàn)檢測(cè)貓?bào)w內(nèi)剛地弓形蟲(chóng)抗體。結(jié)果證明ICT是一種快速、簡(jiǎn)便、敏感（敏感度可達(dá)到ELISA的水平）和特異的，適用于現(xiàn)場(chǎng)診斷弓形蟲(chóng)特異性抗體的有效工具。

4.2.6 乳膠凝集試驗(yàn)（LAT）

以乳膠微粒作為載體的凝集反應(yīng)，于恩庶等指出LAT用于檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染初期敏感性好。陳亞棠等認(rèn)為L(zhǎng)AT具有操作簡(jiǎn)單、采血量少和結(jié)果穩(wěn)定而易于觀察等優(yōu)點(diǎn)，適用于大規(guī)模血清流行病學(xué)調(diào)查。倫敦公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室把LAT作為常規(guī)過(guò)篩試驗(yàn)，假陽(yáng)性率為1%～2%。江濤采用重組弓形蟲(chóng)微線(xiàn)體蛋白3的乳膠凝集試驗(yàn)（rMIC3-LAT）檢測(cè)人工感染弓形蟲(chóng)試驗(yàn)豬血清特異性抗體的動(dòng)態(tài)變化，同時(shí)與IHAT和ELISA做比較，發(fā)現(xiàn)LAT的敏感性較IHAT高，檢測(cè)抗體的時(shí)間較ELISA早，并且檢測(cè)的時(shí)間范圍較寬。

總之，LAT具有特異性強(qiáng)、敏感性高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果易于判定的特點(diǎn)，而且既可用于早期診斷，又可用于抗體的監(jiān)測(cè)，適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和大規(guī)模血清流行病學(xué)調(diào)查。但判斷有一定的主觀因素，不能做定量分析。

4.2.7 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）

Nicolan和Rovello首次應(yīng)用該試驗(yàn)診斷弓形蟲(chóng)病。Ondriska等認(rèn)為其是檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染的可靠指標(biāo)，特別是在檢測(cè)個(gè)體樣品時(shí)，如果CFT與IgM或IgA抗體水平相結(jié)合或者與親和IgG抗體水平相結(jié)合能夠更客觀地反映病程。該試驗(yàn)對(duì)牛、山羊等某些動(dòng)物不適用。

4.3 分子生物學(xué)診斷

目前，國(guó)內(nèi)外已經(jīng)建立多種弓形蟲(chóng)病基因診斷方法，主要有PCR與DNA探針技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)單、快速、特異和靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

4.3.1 PCR

應(yīng)用于PCR檢測(cè)的靶基因主要有B1基因、P30（SAG1）基因、ITS1、rDNA（18S rRNA和5.8S rRNA）及529bp重復(fù)序列。B1基因是一種多拷貝基因，且序列高度保守，是目前最為理想的檢測(cè)基因。Burg等于1989年首次以B1基因作為PCR的靶基因，已成功地從細(xì)胞裂解物中檢出僅含的1條弓形蟲(chóng)；李建等選擇B1基因作為靶基因，將PCR檢測(cè)全血DNA與ELISA檢測(cè)血清IgM進(jìn)行比較，結(jié)果PCR陽(yáng)性的最早檢出時(shí)間早于ELISA，可用于弓形蟲(chóng)病的早期診斷。謝德華等以弓形蟲(chóng)核糖體DNA第一內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS1）序列建立了豬弓形蟲(chóng)病特異PCR診斷方法，該方法最低能檢測(cè)到10條弓形蟲(chóng)速殖子的DNA，且與相關(guān)的8種原蟲(chóng)和線(xiàn)蟲(chóng)均無(wú)交叉反應(yīng)。余莉等用529bp重復(fù)序列作為靶基因，建立豬肉PCR檢測(cè)方法，每10g豬肉能檢測(cè)100個(gè)速殖子，而B(niǎo)1基因每10g豬肉能檢測(cè)1000個(gè)速殖子，其敏感性是B1基因的10倍。

為提高試驗(yàn)的敏感性和特異性，在普通PCR基礎(chǔ)上，發(fā)展了巢式PCR、套式PCR、RT-PCR等。Johnson等根據(jù)SAG1基因設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物，先用DS29和DS30引物對(duì)擴(kuò)增，再用DS38和DS39引物對(duì)進(jìn)行第二次擴(kuò)增，其敏感性可達(dá)0.05pg弓形蟲(chóng)DNA。陳曉光等建立巢式PCR，最低可檢測(cè)出1pg的弓形蟲(chóng)DNA；Sawa等用巢式PCR檢出了0.05pg的P30DNA，理論上相當(dāng)于一個(gè)速殖子的基因組DNA；Ana Hurtado等建立的單管套式PCR檢測(cè)方法，所得的結(jié)果與用IFAT所得的結(jié)果基本一致，而且敏感性達(dá)到0.1pg弓形蟲(chóng)RH株DNA。

4.3.2 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）

LAMP是Notomi等于2000年報(bào)道的一種新的核酸擴(kuò)增技術(shù)，它通過(guò)BstDNA聚合酶進(jìn)行鏈的自動(dòng)循環(huán)代替DNA經(jīng)典合成。LAMP只需要在等溫條件下（63～65℃），30～60min就可以合成10～20μg的DNA，與PCR相比，不需要染色，肉眼就可以觀察結(jié)果。楊秋林等根據(jù)弓形蟲(chóng)特異性基因B1的基因序列設(shè)計(jì)一套用于LAMP的特異性引物，試驗(yàn)顯示出較好的特異性與敏感性。Zhang等用弓形蟲(chóng)的529bp的高度保守的重復(fù)序列設(shè)計(jì)LAMP引物，敏感性達(dá)85.7%，而PCR敏感性為76.9%。Krasteva等運(yùn)用弓形蟲(chóng)單拷貝基因SAG1設(shè)計(jì)LAMP引物擴(kuò)增弓形蟲(chóng)DNA，與PCR相比更敏感。Sotiriadou等用LAMP擴(kuò)增弓形蟲(chóng)B1和OWP基因檢測(cè)水體弓形蟲(chóng)，可以檢測(cè)到0.1個(gè)速殖子。

4.3.3 DNA探針

Blanco等建立了RH株弓形蟲(chóng)基因文庫(kù)，篩選出一個(gè)重復(fù)片段，用32P標(biāo)記作為探針，斑點(diǎn)雜交可檢測(cè)到80pg以上純化弓形蟲(chóng)DNA。夏愛(ài)娣等也建立了弓形蟲(chóng)人株（ZS-2）株弓形蟲(chóng)基因文庫(kù)，篩選了一個(gè)1.1kb特異性DNA片段并用32P標(biāo)記作為探針檢測(cè)弓形蟲(chóng)，敏感度為500pg純化弓形蟲(chóng)DNA。Angel等采用ABGTg7標(biāo)記的探針雜交檢測(cè)急性弓形蟲(chóng)腦炎病人DNA，敏感性為66.7%。目前用于弓形蟲(chóng)檢測(cè)的探針多為特異性DNA克隆片段或人工合成的寡核苷酸探針，雖然敏感性高，但其制備需要一定條件，且費(fèi)用較高，不易推廣。

分子生物學(xué)診斷是非常敏感和特異的方法，但其對(duì)試驗(yàn)環(huán)境和操作者技術(shù)要求高，有許多因素影響其結(jié)果，且費(fèi)用較高不利于普及。在實(shí)際操作中還是以血清學(xué)檢測(cè)為主。