在臨床實(shí)踐中，是否有必要用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)同時測定所有樣品中的25OHD2和25OHD3
背景和研究目的
中國對維生素D檢測的需求越來越大。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)具有良好的特異性和準(zhǔn)確性，但需要昂貴的儀器、經(jīng)驗(yàn)豐富的操作人員和相對復(fù)雜的血清預(yù)處理。自動免疫法簡單方便，但只能測定總25羥基維生素D(25OHD)。
本研究旨在探討液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定臨床患者25OHD2和25OHD3水平的應(yīng)用，為臨床醫(yī)生和實(shí)驗(yàn)室人員選擇合適的25OHD測定方法提供參考。
方式
調(diào)查2015年5月至2017年2月，北京協(xié)和醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室對23695例患者的維生素D 25OHD2和25OHD進(jìn)行了LC-MS/MS測定。液質(zhì)聯(lián)用法是我們實(shí)驗(yàn)室自行建立的。
結(jié)果
25OHD2(≥2.5ng/mL)檢出率為16.4%(3877/23695)。
男性25OHD2的檢出率明顯低于女性(P
2800份(17.5%)女性樣本含有可檢測的25OHD2(中位數(shù):4.0 ng/ml；2.5%~97.5%: 2.5~20.6納克/毫升)。
在3877份含有可檢測25OHD2的樣品中，男性的25OHD3顯著高于女性，但總25ohd3無顯著差異。
25OHD2在總25OHD中所占比例為1.3%~100%，但87.5%(3391/3877)的樣品中可檢測的25OHD2小于10ng/mL，25OHD2與25OHD3呈負(fù)相關(guān)(r =-0.197，P
結(jié)論
25OHD2檢出率較高，但在已檢測維生素d的患者中含量大多較低，免疫法可作為無LC-MS/MS檢測能力實(shí)驗(yàn)室的替代方法，明確使用維生素D2補(bǔ)充劑的患者應(yīng)推薦LC-MS/MS法。
批評
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目前維生素D是科學(xué)界的熱點(diǎn)，維生素D的檢測也逐漸增多。25OHD是衡量和監(jiān)測體內(nèi)維生素d營養(yǎng)狀況的最佳指標(biāo)。它主要來自兩種形式:25OHD2和25OHD3。前者主要來自植物性食物(如蘑菇和其他蘑菇)和補(bǔ)充劑，而后者主要來自紫外線輻射的自我合成。
25OHD的檢測方法發(fā)展迅速。目前常用的檢測方法有酶聯(lián)免疫吸附法、化學(xué)發(fā)光法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC/MS/MS)。
免疫法因其自動化、方便、節(jié)省人力、分析時間短等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于臨床，但它只能測定25OHD的總量，不能區(qū)分25OHD2和25OHD3。對于目前的免疫學(xué)方法，25OHD2是結(jié)果可比性差的一個重要原因。
雖然液質(zhì)聯(lián)用法被認(rèn)為是25OHD檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但它可以同時區(qū)分25OHD2和25OHD3。然而，由于其發(fā)展不成熟、配套試劑不完善、大量人工操作和儀器昂貴，尚未在臨床上得到廣泛應(yīng)用。而且臨床上含有25OHD2的樣本占多大比例，25OHD2的含量是多少，臨床上是否有必要使用特異性更好的LC-MS/MS？
前期我們的研究團(tuán)隊(duì)對維生素D做了大量的研究，建立了LC-MS/MS測定25OHD2和25OHD3的方法(于等，中國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，37 (8): 617-622)，對比了3-epi 25OHD3對LC-MS/MS臨床測定25OHD的影響(于S. 49(13-14):1004-8)，發(fā)現(xiàn)采血管對結(jié)果有顯著影響Rep，5，14636)。在以往維生素D研究的基礎(chǔ)上，統(tǒng)計(jì)了2015年5月至2017年2月北京協(xié)和醫(yī)院所有應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測的病例
雖然25OHD2的含量相對較低，但對于其他沒有明確使用25OHD2的臨床樣本，免疫接種可能是一種快速方便的選擇。但兩位審稿人一致指出，25OHD2是導(dǎo)致25OHD檢測免疫分析準(zhǔn)確性差的重要因素，中國人群中25OHD2的檢出率相對較高，應(yīng)推薦所有樣本首選LC-MS/MS。
從測試結(jié)果的準(zhǔn)確性來看，液質(zhì)聯(lián)用應(yīng)該是25OHD的推薦方法。但考慮到臨床要求的及時性和方便性，以及檢驗(yàn)結(jié)果的差異對臨床醫(yī)生診療的影響，實(shí)驗(yàn)室和臨床專家有必要討論免疫法是否也可以作為未明確使用25 OHD的臨床樣本的快速篩查方法。
通訊作者簡介
秋凌
研究員，博士生導(dǎo)師。北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床檢驗(yàn)診斷科副主任，北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科副主任，分管醫(yī)療和質(zhì)量。
主要從事臨床生化和臨床實(shí)驗(yàn)室管理。
研究興趣:急性腎損傷和急性心肌損傷標(biāo)志物、老年癡呆癥、維生素和疾病標(biāo)志物的研究與應(yīng)用，臨床生化實(shí)驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)室流程再造。作為子項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，承擔(dān)了科技部2個重點(diǎn)支持項(xiàng)目、863項(xiàng)目1個、973項(xiàng)目1個、啟動資金1個、四川省重點(diǎn)支持項(xiàng)目1個。作為IFCC全球參考區(qū)間在中國的研究項(xiàng)目。他主持了40多項(xiàng)臨床試劑注冊試驗(yàn)。作為第一作者和通訊作者，在SCI和核心期刊上發(fā)表文章50余篇，學(xué)術(shù)著作副主編2人，參與編輯10人。
現(xiàn)為中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)分會生化組成員，北京檢驗(yàn)分會會員。中國合格評定國家認(rèn)可委員會實(shí)驗(yàn)室技術(shù)委員會醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會委員，ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可主任評審員；衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)委員會臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會成員；中國醫(yī)療器械協(xié)會臨床檢驗(yàn)設(shè)備技術(shù)委員會委員、臨床質(zhì)譜組組長、信息化學(xué)組副組長；北京中西醫(yī)結(jié)合檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會常委、生化組副組長；《臨床檢驗(yàn)雜志》(電子版)編委會、《中國臨床檢驗(yàn)管理雜志》編委會等。
第一作者簡介:
玉松林
北京協(xié)和醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室助理研究員。
主要從事液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的建立及其常規(guī)臨床應(yīng)用。
研究方向:維生素與疾病、微量元素與疾病研究，液相色譜-質(zhì)譜臨床方法開發(fā)與驗(yàn)證。中國醫(yī)療器械協(xié)會臨床檢驗(yàn)設(shè)備技術(shù)委員會秘書，主持國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目1項(xiàng)，參與多項(xiàng)國家研究項(xiàng)目，作為第一作者發(fā)表中英文文章10余篇。
韓仙林
北京協(xié)和醫(yī)院基礎(chǔ)主治醫(yī)師，畢業(yè)于北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院八年，獲臨床醫(yī)學(xué)博士。研究方向:胰腺疾病的診斷和治療及基礎(chǔ)研究。
