做細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室越來越多，計(jì)劃開展或已經(jīng)開展的單位或?qū)嶒?yàn)室必須做到以下幾點(diǎn)。

1.選擇正確的培養(yǎng)基

在培養(yǎng)細(xì)胞之前，你應(yīng)該了解你所培養(yǎng)的細(xì)胞的來源、類型和名稱，查閱一定量的文獻(xiàn)，并確定所需培養(yǎng)液的類型以及是否需要添加特殊成分。常用的細(xì)胞培養(yǎng)液有DMEM、RPMI1640、F12等。一些常見的細(xì)胞基本上可以用這些培養(yǎng)基中的一種培養(yǎng)，有些需要添加某些其他成分。這需要根據(jù)不同的細(xì)胞類型查找ATCC細(xì)胞庫或文獻(xiàn)，以找到所需的最佳培養(yǎng)物。選擇合適的培養(yǎng)基是培養(yǎng)細(xì)胞的第一步。

2.了解細(xì)胞的生長習(xí)性

不同的細(xì)胞有不同的生長習(xí)性。比如成纖維細(xì)胞是貼壁的，有一定的密度依賴性。如果密度小，可能不會增殖，狀態(tài)差。當(dāng)接種密度較大時，需要隔天傳代，頻繁傳代會影響細(xì)胞狀態(tài)，再如RPMI-8226人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞，懸浮生長，離心取上清液傳代即可。總之，只有了解細(xì)胞生長習(xí)性，正確計(jì)數(shù)，才能掌握傳代的密度。

3.選擇優(yōu)質(zhì)血清

血清含有細(xì)胞生長所必需的生長因子。作為哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的補(bǔ)充，血清的添加非常重要。因此，選擇高質(zhì)量的血清是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵！

4.培養(yǎng)基的及時傳代和更換

細(xì)胞增殖到一定密度后，應(yīng)及時傳代培養(yǎng)，并根據(jù)細(xì)胞的生長速度和密度及時更換培養(yǎng)基。如果更換過于頻繁，培養(yǎng)液浪費(fèi)，更換不夠及時，細(xì)胞狀態(tài)會變差，一般需要隔天更換培養(yǎng)液，可以根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型進(jìn)行調(diào)整。

5.絕對無菌意識

關(guān)注眼前的一切。如果不育意識差，細(xì)胞內(nèi)混有微生物，千里之堤，潰于蟻巢。細(xì)菌的生長速度和破壞力會很快占據(jù)培養(yǎng)皿，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。有些初學(xué)者會在培養(yǎng)基中添加1%的雙抗體。但是不育意識不強(qiáng)，雙抗體救不了你的細(xì)胞！

6.專注的護(hù)理和頻繁的觀察

這樣做，你可以開始提升你的細(xì)胞，但再次重申細(xì)胞是脆弱的。在飼養(yǎng)細(xì)胞的過程中，難免會出現(xiàn)一些意想不到的問題。如果你想成功地培養(yǎng)細(xì)胞，請始終考慮它們。

經(jīng)常觀察是不夠的，初期一天觀察兩次。如果出現(xiàn)任何意外情況，及時處理可以保證收獲一盤“漂亮”的細(xì)胞。