一、普通光學(xué)顯微鏡的主要結(jié)構(gòu)

普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)主要分為三個(gè)部分:機(jī)械部分、照明部分和光學(xué)部分。顯微鏡各部分的結(jié)構(gòu)如下:

1.機(jī)械構(gòu)件

(1)鏡座:是支撐整個(gè)鏡體的顯微鏡底座。

(2)鏡柱:是鏡座上的直立部分，用于連接鏡座和鏡臂。

(3)鏡臂:一端連接在鏡柱上，另一端連接在鏡筒上，鏡筒是取放顯微鏡時(shí)的手握部分。

(4)鏡筒:連接在鏡臂的前上方，上端安裝目鏡，下端安裝物鏡轉(zhuǎn)換器。

(5)物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)器):連接到棱鏡殼的下部，可以自由旋轉(zhuǎn)。圓盤(pán)上有3-4個(gè)圓孔，是安裝物鏡的地方。旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器時(shí)，可以更換不同倍數(shù)的物鏡。當(dāng)你聽(tīng)到敲門(mén)聲時(shí)，你可以觀察。此時(shí)物鏡光軸正好對(duì)準(zhǔn)光孔中心，光路接通。

(6)載物臺(tái)(載物臺(tái)):在鏡筒下面，有方形和圓形，用于放置載玻片標(biāo)本，中間有一個(gè)透光孔。我們使用的顯微鏡在載物臺(tái)上有一個(gè)載玻片標(biāo)本推動(dòng)器(推動(dòng)器)，推動(dòng)器左側(cè)有一個(gè)彈簧夾，用于固定載玻片標(biāo)本，在鏡筒下方有一個(gè)推動(dòng)器調(diào)節(jié)輪，用于左右、前后移動(dòng)載玻片標(biāo)本。

(7)調(diào)節(jié)器:是安裝在鏡頭立柱上的大螺旋和小螺旋，使鏡頭臺(tái)在調(diào)節(jié)過(guò)程中上下移動(dòng)。

①粗調(diào)器(粗螺旋):大螺旋被稱(chēng)為粗調(diào)器，它能使載物臺(tái)在移動(dòng)時(shí)快速、大幅度地升降，因此能快速調(diào)節(jié)物鏡與標(biāo)本之間的距離，使物像出現(xiàn)在視野中。通常，在使用低功率鏡子時(shí)，使用粗調(diào)器來(lái)快速找到物體圖像。

②微調(diào)器(細(xì)螺旋):小螺旋對(duì)微調(diào)器進(jìn)行刻度，可以使鏡臺(tái)在移動(dòng)時(shí)緩慢升降，在使用大功率鏡子時(shí)經(jīng)常使用，以獲得更清晰的物體，觀察標(biāo)本不同層次和深度的結(jié)構(gòu)。

2.照明部分

它安裝在鏡臺(tái)下面，包括一個(gè)反射鏡和一個(gè)集光器。

(1)反光鏡:安裝在鏡座上，可以任意方向旋轉(zhuǎn)。它有平面和凹面，它的作用是將光源發(fā)出的光反射到聚光器上，然后通過(guò)光孔照射標(biāo)本。凹面鏡聚光效果強(qiáng)，適合光線弱的時(shí)候使用，平面鏡聚光效果弱，適合光線強(qiáng)的時(shí)候使用。

(2)集光器(聚光器)位于載物臺(tái)下方的集光器架上，集光器架由聚光透鏡和光圈組成，其作用是將光線集中在待觀察的標(biāo)本上。

①聚光器:由一個(gè)或幾個(gè)透鏡組成，起到聚光的作用，加強(qiáng)對(duì)標(biāo)本的照明，使光線進(jìn)入物鏡。鏡頭柱旁邊有一個(gè)調(diào)節(jié)螺絲，可以通過(guò)旋轉(zhuǎn)來(lái)升降聚光器，從而調(diào)節(jié)視野內(nèi)的亮度。

②光圈(虹彩光圈):在聚光器下面，由十幾塊金屬片組成，從外面伸出一個(gè)手柄，可以推動(dòng)手柄調(diào)節(jié)其開(kāi)口的大小來(lái)調(diào)節(jié)光量。

3.光學(xué)部分

(1)目鏡:安裝在鏡筒上端，通常2-3個(gè)目鏡上刻有5×、10×或15×符號(hào)以表示放大倍數(shù)，一般安裝10×目鏡。

(2)物鏡:裝在鏡筒下端的旋轉(zhuǎn)體上，一般有3-4個(gè)物鏡，其中刻有“10×”符號(hào)的最短的是低倍率鏡，刻有“40×”符號(hào)的較長(zhǎng)的是高倍率鏡，刻有“100×”符號(hào)的最長(zhǎng)的是油鏡。此外，在大功率鏡和油鏡上往往還會(huì)加一圈不同顏色的

物鏡上還有光圈比(N.A .)的標(biāo)記，反映了鏡頭的分辨率。數(shù)字越大，分辨率越高。每個(gè)物鏡的孔徑比如下:

物鏡的孔徑比(n.a .)和工作距離(mm)

10× 0.25 5.40

40× 0.65 0.39

100× 1.30 0.11

表中的工作距離是指顯微鏡處于工作狀態(tài)(物像調(diào)整清晰)時(shí)，物鏡下表面與蓋玻片上表面的距離(蓋玻片厚度一般為0.17mm)。物鏡放大倍數(shù)越大，其工作距離越小。

顯微鏡的放大率是物鏡和目鏡放大率的乘積。比如物鏡為10×目鏡為10×放大倍數(shù)為10×10=100。

4.在使用成像系統(tǒng)的過(guò)程中，為了便于觀察，通常將成像系統(tǒng)安裝在光學(xué)顯微鏡的目鏡上，通過(guò)成像系統(tǒng)將顯微鏡視場(chǎng)內(nèi)的圖像傳輸?shù)诫娮语@示屏上，以便更好的觀察顯微鏡視場(chǎng)內(nèi)的標(biāo)本。如下圖所示:

二、水浸片的生產(chǎn)

在水產(chǎn)疾病的診斷過(guò)程中，最常用的方法是將病變組織制成水浸切片，放在臺(tái)上觀察。具體生產(chǎn)步驟如下:

取一個(gè)干凈的載玻片，滴一滴清水在上面(如果水浸片是直接與水接觸的組織或器官制成的，淡水用于淡水品種，海水用于海水品種，生理鹽水用于不與水接觸的組織和器官制成的水浸片)。首先，從要檢查的部位取一小塊組織。至于載玻片上的水滴，用鑷子輕輕攪拌分散，然后拿一個(gè)干凈的蓋玻片與載玻片的一側(cè)接觸。如果水太多，用紗布或吸水紙吸收蓋玻片周?chē)嘤嗟乃?。以這種方式，制成了水浸板。

在制作水浸片的過(guò)程中，要注意以下幾點(diǎn):

1.不應(yīng)采集過(guò)多的待檢組織樣本，過(guò)多容易導(dǎo)致透光率差，影響顯微鏡觀察。

2.必須先滴水，然后釋放組織，否則會(huì)產(chǎn)生氣泡，影響觀察。

3.水生動(dòng)物不與水接觸的組織器官要用生理鹽水處理，否則病原體會(huì)因滲透壓不同而破碎、縮小或死亡，影響診斷。

4.水浸片應(yīng)在現(xiàn)場(chǎng)制作，不應(yīng)儲(chǔ)存。

第三，使用普通光學(xué)顯微鏡的步驟。

1.實(shí)驗(yàn)時(shí)，顯微鏡應(yīng)放在座位前桌面略偏左的位置，鏡座離桌邊約6 ~ 7厘米。

2.打開(kāi)光源開(kāi)關(guān)，將光強(qiáng)調(diào)節(jié)到合適的大小。

3.轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍率透鏡面向臺(tái)上的通光孔。先將鏡頭調(diào)整到離舞臺(tái)1 ~ 2 cm左右，然后用左眼看目鏡，再調(diào)整聚光器的高度，最大限度地調(diào)整孔徑光闌，使光線通過(guò)聚光器進(jìn)入鏡筒，視野開(kāi)闊。

4.將待觀察的載玻片放在臺(tái)上，使載玻片的被觀察部分位于光孔的中心，然后用標(biāo)本夾夾住載玻片。

5.用低倍鏡觀察(物鏡10X，目鏡10X)。觀察前，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦手輪，使載物臺(tái)上升，物鏡逐漸靠近載玻片。需要注意的是，物鏡不能接觸載玻片，以防透鏡壓壞載玻片。然后，左眼在目鏡里，右眼閉著(養(yǎng)成睜眼用顯微鏡觀察的習(xí)慣，這樣觀察的時(shí)候可以用右眼看圖紙)，轉(zhuǎn)動(dòng)粗對(duì)焦手輪，讓載物臺(tái)慢慢下降，很快就可以看到玻璃里物質(zhì)的放大圖像。

6.如果視野中看到的物體圖像不符合實(shí)驗(yàn)要求(物體圖像偏離視野)，可以慢慢調(diào)整舞臺(tái)的移動(dòng)手柄。調(diào)整時(shí)需要注意的是，幻燈片的移動(dòng)方向正好與視野中看到的物體圖像的移動(dòng)方向相反。如果物體圖像不清晰，可以調(diào)整微聚焦手輪，直到物體圖像清晰。

7.如果使用高倍率物鏡進(jìn)行觀察，則在切換高倍率物鏡之前，應(yīng)將需要放大觀察的部分物像移至視野中心(當(dāng)?shù)捅堵饰镧R切換到高倍率物鏡進(jìn)行觀察時(shí)，物像在視野中的范圍大大縮小)。一般功能正常的顯微鏡，基本上都是用低倍率物鏡和高倍率物鏡對(duì)焦。用低倍物鏡觀察清楚時(shí)，用高倍物鏡可以看到物像，但物像不一定清晰，可以通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)微動(dòng)調(diào)焦手輪來(lái)調(diào)節(jié)。

8.大功率物鏡轉(zhuǎn)換后，看清物像后，可根據(jù)需要調(diào)整光圈大小或聚光器高度，使光線符合要求(一般用大功率物鏡代替小功率物鏡觀察時(shí)，視場(chǎng)略暗，需調(diào)整光強(qiáng))。

9.觀察后，先將物鏡從光孔中取出，然后將光圈調(diào)整到最大，然后慢慢降低載物臺(tái)，檢查零件是否損壞。應(yīng)特別注意檢查物鏡是否沾有水和油。如果沾了水或油，要用鏡頭紙擦拭，檢查后可以鋪上防塵布。

四、使用不同放大倍數(shù)的顯微鏡鏡頭

1.低功率反射鏡的使用

(1)取放顯微鏡:顯微鏡通常存放在柜子或盒子中，使用時(shí)從柜子中取出。右手握住鏡臂，左手握住鏡座，將顯微鏡放在左肩前方的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。鏡座后端距離桌子1-2英寸，方便坐和操作。

(2)對(duì)光:用拇指和中指移動(dòng)旋轉(zhuǎn)器(不要握著物鏡移動(dòng))，使低倍鏡對(duì)準(zhǔn)載物臺(tái)的通光孔(旋轉(zhuǎn)時(shí)聽(tīng)到敲擊聲，表示物鏡光軸對(duì)準(zhǔn)鏡筒中心)。打開(kāi)光圈，抬起集光器，將反射鏡轉(zhuǎn)向光源，用左眼在目鏡上觀察(打開(kāi)右眼)，同時(shí)調(diào)整反射鏡的方向，直到視野中的光線均勻明亮。

(3)載玻片標(biāo)本的放置:取一個(gè)載玻片標(biāo)本放在鏡臺(tái)上，確保帶蓋玻片的一面朝上，切勿倒置。用推動(dòng)器的彈簧夾住，然后轉(zhuǎn)動(dòng)推動(dòng)器的螺釘，將待觀察的部分調(diào)整到光孔的中心。

(4)調(diào)整焦距:用左手逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)儀，使載物臺(tái)從物鏡到標(biāo)本慢慢上升到5 mm左右。升起舞臺(tái)時(shí)，注意不要在目鏡上觀察。一定要看著鏡臺(tái)從右側(cè)上升，以免上升太多，對(duì)鏡片或標(biāo)本切片造成損傷。然后雙眼同時(shí)睜開(kāi)，用左眼在目鏡上觀察，左手慢慢順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)儀，使載物臺(tái)慢慢下降，直到視野中出現(xiàn)清晰的物體。

如果對(duì)象圖像不在視野的中心，調(diào)整滑塊推進(jìn)器將其調(diào)整到中心(注意滑塊的移動(dòng)方向與對(duì)象圖像在視野中的移動(dòng)方向相反)。如果視野中的亮度不合適，可以通過(guò)提升集光器的位置或打開(kāi)和關(guān)閉光圈來(lái)調(diào)節(jié)。如果調(diào)整焦距時(shí)載物臺(tái)下降超過(guò)工作距離(>:5.40mm)而沒(méi)有看到圖像，說(shuō)明操作失敗，應(yīng)重新操作，切不可心急盲目上鏡臺(tái)。

2.大功率反射鏡的使用

(1)選擇目標(biāo):首先將待進(jìn)一步觀察的部分調(diào)整到低功率鏡下的中心，同時(shí)將物體圖像調(diào)整到最清晰的程度，以便在高功率鏡下觀察。

(2)轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，更換大功率鏡頭。轉(zhuǎn)換高倍率鏡頭時(shí)，轉(zhuǎn)速要慢，從側(cè)面觀察(防止高倍率鏡頭與載玻片碰撞)。如果高倍率鏡頭與載玻片發(fā)生碰撞，說(shuō)明低倍率鏡頭焦距沒(méi)有調(diào)整，應(yīng)該重新操作。

(3)調(diào)節(jié)焦距:切換大功率鏡后，用左眼在目鏡上觀察，此時(shí)一般可以看到不清晰的物像，可以逆時(shí)針?lè)较蛞苿?dòng)微調(diào)器的螺旋0.5-1圈左右，得到清晰的物像(不要用粗調(diào)器！)

如果視野亮度不合適，可以通過(guò)集光器和光圈來(lái)調(diào)節(jié)。如果需要更換載片樣本，必須順時(shí)針旋轉(zhuǎn)粗調(diào)器(切勿轉(zhuǎn)錯(cuò)方向)以降低載物臺(tái)，然后才能取出載片樣本。

3.油鏡怎么用

(1)使用油鏡前，必須用低、高倍鏡觀察，然后將需要進(jìn)一步放大的部分移到視野中心。

(2)將集光器升至最高位置，并將光圈打開(kāi)至最大。

(3)轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使大功率鏡頭離開(kāi)通光孔，在被觀察部位的載玻片上滴一滴芳香瀝青，然后慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)油鏡。更換油鏡時(shí)，從側(cè)面水平看鏡片與載玻片之間的距離，這樣鏡片就可以浸入油中而不會(huì)壓碎載玻片。

(4)用左眼觀察目鏡，慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)器，直到物體圖像清晰。

如果沒(méi)有物體圖像或目標(biāo)被忽略而想再次搜索，在加油區(qū)外搜索時(shí)應(yīng)遵循低倍率→高倍率→油鏡的程序。加油區(qū)重新搜索應(yīng)遵循低倍率→油鏡的程序，不得通過(guò)高倍鏡，以免油污染鏡頭。

(5)使用油鏡后，用鏡紙上的少量二甲苯擦去鏡片和標(biāo)本上的芳香瀝青，然后用干燥的鏡紙清洗干凈。

五、顯微鏡的使用注意事項(xiàng)

(一)、正確安裝的問(wèn)題

使用顯微鏡前，應(yīng)先安裝顯微鏡的目鏡和物鏡。目鏡的安裝比較簡(jiǎn)單，主要問(wèn)題在于物鏡的安裝。因?yàn)槲镧R的鏡頭比較貴，安裝時(shí)如果螺紋沒(méi)有關(guān)好，很容易掉在地上，造成鏡頭損壞。因此，為了安全起見(jiàn)，強(qiáng)調(diào)操作者在安裝物鏡時(shí)，要用左手食指和中指握住物鏡，然后用右手安裝物鏡，這樣即使安裝不當(dāng)，也不會(huì)掉在地上。

(2)、正確光線的問(wèn)題

使用顯微鏡時(shí)，瞄準(zhǔn)光線是重要的一步。一些操作者隨意轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡以面對(duì)通光孔，而不是根據(jù)需要用低功率鏡瞄準(zhǔn)光。我轉(zhuǎn)動(dòng)鏡子喜歡用一只手，經(jīng)常把鏡子拉下來(lái)。需要叫一面低功率的鏡子對(duì)準(zhǔn)光線。光線強(qiáng)的時(shí)候用小光圈和平面鏡，光線弱的時(shí)候用大光圈和凹面鏡，雙手旋轉(zhuǎn)鏡子，直到看到均勻明亮的圓形視野。光線對(duì)準(zhǔn)后，不要隨意移動(dòng)顯微鏡，以免光線無(wú)法通過(guò)反射鏡準(zhǔn)確進(jìn)入光孔。

(3)、正確使用準(zhǔn)聚焦螺旋

利用準(zhǔn)焦距螺旋調(diào)整焦距，找到物體圖像，可以說(shuō)是顯微鏡使用中最重要的一步，也是操作者最困難的一步。操作人員在操作過(guò)程中容易出現(xiàn)以下錯(cuò)誤:一是大功率鏡下直接對(duì)焦；第二，無(wú)論鏡筒上升還是下降，眼睛始終是看著目鏡的；第三，我們不知道物距的臨界值，物距調(diào)整到2~3 cm還在往上走，準(zhǔn)焦螺絲旋轉(zhuǎn)的速度很快。前兩個(gè)誤差往往會(huì)導(dǎo)致物鏡與加載物碰撞，損壞加載物或透鏡，而第三個(gè)誤差是操作者使用顯微鏡時(shí)最常見(jiàn)的現(xiàn)象。鑒于上述誤差，操作人員應(yīng)注意焦距必須在低功率鏡中向下調(diào)整。首先轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦螺絲，使鏡筒慢慢下降，物鏡靠近載玻片。但是，注意不要讓物鏡碰到載玻片。在這個(gè)過(guò)程中，眼睛應(yīng)該從側(cè)面看物鏡，然后用左眼看目鏡，慢慢反向調(diào)整粗對(duì)焦螺絲，使鏡筒慢慢上升，直到看到物體圖像。顯微鏡的物距一般在1 cm左右，所以如果物距遠(yuǎn)超過(guò)1 cm，但仍看不到物像，可能是標(biāo)本不在視野內(nèi)，或者粗準(zhǔn)焦螺旋旋轉(zhuǎn)速度過(guò)快。此時(shí)，應(yīng)調(diào)整裝載位置，然后重復(fù)上述步驟。當(dāng)模糊的物體圖像出現(xiàn)在視野中時(shí)，需要切換到精細(xì)的準(zhǔn)聚焦螺旋調(diào)整。這樣才能縮小搜索范圍，提高尋找物體圖像的速度。

(4)物鏡轉(zhuǎn)換問(wèn)題

在使用低倍率鏡和切換到高倍率鏡時(shí)，操作者往往喜歡用手指直接推動(dòng)和旋轉(zhuǎn)物鏡，被認(rèn)為是省力的，但容易使物鏡光軸偏離，因?yàn)檗D(zhuǎn)換器的材料柔軟，精度高，螺紋受力不均，容易松動(dòng)。一旦線斷了，整個(gè)轉(zhuǎn)換器就報(bào)廢了。操作者應(yīng)手持轉(zhuǎn)換器的下旋轉(zhuǎn)板來(lái)轉(zhuǎn)換物鏡。

(5)正確使用眼睛的問(wèn)題

用顯微鏡觀察物體時(shí)，雙眼應(yīng)同時(shí)睜開(kāi)，左眼應(yīng)望向目鏡。但是，很多運(yùn)營(yíng)商往往做不到這一點(diǎn)。他們喜歡用手遮住右眼或者干脆閉上右眼，不符合實(shí)驗(yàn)的觀察要求。這種不良習(xí)慣會(huì)造成左眼疲勞，同時(shí)他們也不能邊觀察邊畫(huà)畫(huà)。需要注意的是，左眼要盡量靠近目鏡，右眼盡量往視野里看。如果反復(fù)訓(xùn)練，就會(huì)達(dá)到同時(shí)睜眼觀察的要求?；蛘吣憧梢宰鲆韵戮毩?xí):睜開(kāi)眼睛，用一張紙或手掌放在鼻子前站在兩眼之間，讓左右眼不能看對(duì)方的對(duì)面，然后有意識(shí)地先看左邊，再看右邊，每天早晚各做3~5次，不到一周就能學(xué)會(huì)。

(6)視野中的污點(diǎn)判斷問(wèn)題

轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，污漬在目鏡上移動(dòng)。如果你不動(dòng)，你就不在目鏡上

移動(dòng)載玻片，污漬在載玻片上移動(dòng)。如果它不動(dòng)，就不在滑梯上

如果視野中的污漬不在載玻片和目鏡上，那就是在物鏡上。

(七)顯微鏡視野內(nèi)載玻片和物體的運(yùn)動(dòng)

因?yàn)槭欠崔D(zhuǎn)圖像，所以幻燈片的移動(dòng)方向與物體圖像的移動(dòng)方向相反。

(八)使用過(guò)程中需要注意的其他問(wèn)題

1.拿鏡子時(shí)必須是右手握臂，左手握托架的姿勢(shì)，不能單手抽出，以免零件脫落或與其他地方碰撞。

2.小心處理。請(qǐng)勿將顯微鏡放在測(cè)試臺(tái)的邊緣，以免磕碰掉在地上。

3.保持顯微鏡清潔。光學(xué)和照明部分只能用鏡面紙擦拭。不要用布用嘴或手擦拭，用布擦拭機(jī)械部件。

4.水滴、酒精或其他藥物不應(yīng)接觸鏡頭和鏡臺(tái)，如果被污染，應(yīng)立即擦拭干凈。

5.放置載玻片標(biāo)本時(shí)，對(duì)準(zhǔn)光孔中心，不要將載玻片向后放，以免載玻片被壓碎或物鏡損壞。

6.養(yǎng)成雙眼同時(shí)睜開(kāi)，左眼觀察視野，右眼畫(huà)畫(huà)的習(xí)慣。

7.不要隨意取下目鏡，以免灰塵落入物鏡，也不要隨意拆卸各種零件，以免損壞。

8.使用后必須恢復(fù)后才能放回鏡盒。步驟如下:取下試件，轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)器使鏡片離開(kāi)光孔，放下鏡臺(tái)，將鏡子平放，放下集光器(但不要接觸鏡子)，關(guān)閉光圈，退回推片器，蓋上絲布和外罩，放回試驗(yàn)臺(tái)柜。最后填寫(xiě)登記表。(注意:反射鏡通常應(yīng)該垂直放置，但有時(shí)因?yàn)榧馄鳑](méi)有升高到合適的高度，鏡臺(tái)下降會(huì)損壞光圈，所以這里改為水平放置。

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