粗DNA提取與鑒定實(shí)驗(yàn)是高考大綱中的考點(diǎn)之一，但在三中必修、選修課中沒有出現(xiàn)，容易被忽視。列出考試重點(diǎn)，快速學(xué)習(xí)。

提取生物大分子的基本思路是選擇一定的物理或化學(xué)方法來分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。對(duì)于DNA的粗提，需要利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)之間的物理化學(xué)性質(zhì)差異來提取DNA，去除其他成分。

1.脫氧核糖核酸的溶解度

DNA、蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同。利用這一特性，選擇合適的鹽濃度，可以充分溶解DNA，沉淀雜質(zhì)，反之亦然，從而達(dá)到分離的目的。

2.脫氧核糖核酸對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性

蛋白酶可以水解蛋白質(zhì)，但對(duì)DNA沒有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)經(jīng)不起60-80℃的高溫，而DNA只有在80℃以上才會(huì)變性。洗潔精可以崩解細(xì)胞膜，但對(duì)DNA沒有影響。

3.DNA的鑒定

沸水浴中，DNA接觸二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。

4.實(shí)驗(yàn)材料的選擇

所有含有DNA的生物材料都可以考慮，但使用DNA含量相對(duì)較高的生物組織更容易成功。

5.將細(xì)胞粉碎，得到含有脫氧核糖核酸的濾液

在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，用玻璃棒攪拌，過濾，收集濾液。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，加入一定的洗滌劑和鹽，充分?jǐn)嚢柩心?，過濾后收集研磨液。

6.濾液中的雜質(zhì)被除去

方案一的原理是DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA；方案3的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。

特別提醒:

(1)為什么反復(fù)溶解沉淀DNA，可以去除雜質(zhì)？

用高鹽濃度溶液溶解DNA，可以去除高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)可以通過沉淀低鹽濃度的DNA來去除。因此，通過反復(fù)溶解和沉淀DNA，可以除去不同于DNA溶解度的各種雜質(zhì)。

(2)方案二和方案三有什么區(qū)別？

第二種方案是用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而將提取的DNA從蛋白中分離出來；方案三利用DNA和蛋白質(zhì)耐高溫的差異，使蛋白質(zhì)變性，從DNA中分離出來。

7.脫氧核糖核酸沉淀和鑒定

過濾處理后的溶液，加入與濾液相同體積的冷卻酒精溶液，并在兩個(gè)試管中各加入4毫升二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管放入沸水中加熱5min。試管冷卻后，比較兩個(gè)試管溶液的顏色變化，看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。

8.以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，

每100毫升血液中應(yīng)加入3g檸檬酸鈉，以防止血液凝固。

9.二苯胺試劑

現(xiàn)在就要用，不然影響鑒定效果。

10.脫氧核糖核酸溶解度與氯化鈉溶液濃度的關(guān)系:

當(dāng)氯化鈉溶液的濃度低于0.14摩爾/升時(shí)，DNA的溶解度隨著濃度的增加而降低。當(dāng)氯化鈉溶液的濃度高于0.14摩爾/升時(shí)，DNA的溶解度隨著濃度的增加而增加。2ml/ln ACl和0.015ml/ln ACl作為溶出試劑。

11.雞血細(xì)胞液體容器

首選塑料容器。

標(biāo)簽:采取一種粗提取和鑒定的方法