導(dǎo)讀

首先來看下我們需要篩選的目的細(xì)胞，既B細(xì)胞和瘤細(xì)胞的融合細(xì)胞，但在細(xì)胞融合的過程中除了B細(xì)胞與瘤細(xì)胞能融合外，B細(xì)胞自身、瘤細(xì)胞自身也都能發(fā)生融合，另外還有多個B細(xì)胞與多個瘤細(xì)胞融合的情況（這種細(xì)胞不穩(wěn)定，幾乎不能存活)以及未融合的細(xì)胞。B細(xì)胞和B細(xì)胞的自身融合細(xì)胞，其仍然不能無限增殖，在體外增殖數(shù)代后就會死亡，不足為慮，主要的問題是如何消滅未融合和自身融合的瘤細(xì)胞。

核酸合成途徑

為了能讓大家更好地理解HAT培養(yǎng)基的篩選原理，我們需要回顧下核酸合成的途徑，看下圖：

核酸合成主要途徑

先看嘌呤核苷酸的合成，生物體內(nèi)先由5-磷酸核糖焦磷酸合成次黃嘌呤核苷酸，次黃嘌呤核苷酸合成后，經(jīng)氨基化即可形成腺嘌呤核苷酸；經(jīng)氧化和氨基化即可形成鳥嘌呤核苷酸。再來看嘧啶核苷酸的合成，生物體內(nèi)先先由氨甲酰磷酸和天冬氨酸合成尿嘧啶核苷酸，然后尿嘧啶核苷酸經(jīng)磷酸化、氨基化就可形成胞嘧啶核苷三磷酸；在核糖核酸還原酶的還原作用下可形成尿嘧啶脫氧核糖核苷酸，再經(jīng)過甲基化后可形成胸腺嘧啶核苷酸。這就是體內(nèi)核酸合成的主要途徑。

核酸合成旁路途徑

當(dāng)體內(nèi)核酸合成主要途徑發(fā)生意外情況時，還有一條補(bǔ)救的旁路途徑來彌補(bǔ)，就是次黃嘌呤和5-磷酸核糖焦磷酸在磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）的作用下可以直接合成次黃嘌呤核苷酸，然后再由次黃嘌呤核苷酸合成鳥嘌呤核苷酸和腺嘌呤核苷酸。

如何篩選那?

既然體內(nèi)有兩條核酸合成途徑，那么就可以利用其中一條來進(jìn)行篩選了，看圖：

8-氮鳥嘌呤篩選原理

科學(xué)先驅(qū)們是這樣解決的：首先用8-氮鳥嘌呤（一種嘌呤類似物）來對瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選，它可以參與核酸合成的旁路途徑，但是由此合成出來的核酸不能具備正常核酸那樣的功能，因此這種細(xì)胞就都會死去，能存活下來的細(xì)胞都是不能進(jìn)行旁路合成核酸，該過程的本質(zhì)就是為了篩選出HGPRT缺陷型細(xì)胞株。這種缺陷型的瘤細(xì)胞與B細(xì)胞進(jìn)行融合，融合后的細(xì)胞則既能通過主要途徑合成核酸，也能通過旁路合成，而未融合瘤細(xì)胞和瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞仍然只能通過主要途徑合成核酸。

HAT選擇培養(yǎng)基篩選原理

在選擇培養(yǎng)基中添加某些物質(zhì)來阻斷核酸的主要途徑，那么未融合的瘤細(xì)胞和瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞在篩選過程中就會死去，能存活下來的就只有能進(jìn)行旁路途徑合成核酸的B細(xì)胞和瘤細(xì)胞的融合細(xì)胞了。A—氨基蝶呤為葉酸的結(jié)構(gòu)類似物，正是它阻斷了核酸合成的主要途徑，阻礙了次黃嘌呤核苷酸和胸腺嘧啶核苷酸的合成。H—次黃嘌呤，可經(jīng)核酸合成旁路途徑合成次黃嘌呤核苷酸，從而完成嘌呤核苷酸的補(bǔ)救合成。T—胸腺嘧啶核苷酸，直接添加到培養(yǎng)基中來補(bǔ)足被阻斷的嘧啶核苷酸的合成。

好了，雜交瘤細(xì)胞的篩選機(jī)制基本就是這樣了，小編講的很簡單，希望大家能夠?qū)慰怪苽浼夹g(shù)有一個更深層次的理解。

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