金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb. 的干燥花蕾或帶初開的花。2005中國藥典以綠原酸和木犀草苷為對(duì)照,采用高效液相色譜法測定其含量。一、 高效液相色譜法⑴2005版中國藥典金銀花含量測定項(xiàng)下:綠原酸含量測定:色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87)為流動(dòng)相;檢測波長為327nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不得低于1000。供試品溶液的制備:取本品粉末(過4號(hào)篩)約0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率35KHz)30分鐘,放冷,再稱定重量,用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過。精密量取續(xù)濾液5ml,置25ml棕色量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。木犀草苷含量測定:色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以0.5%冰醋酸為流動(dòng)相B,按下表進(jìn)行梯度洗脫;檢測波長為350nm。理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。0~30分鐘,流動(dòng)相A10%→30%,流動(dòng)相B90%→70%供試品溶液的制備:取本品粉末(過4號(hào)篩)約3g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率35KHz)1小時(shí),放冷,再稱定重量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
⑵文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC法HPLC法測定金銀花及其制劑中綠原酸的含量時(shí),文獻(xiàn)報(bào)道的色譜條件,常用的流動(dòng)相為乙腈-磷酸溶液、甲醇-1%冰醋酸等。如:毛泉明等采用HPLC法測定銀翹解毒片中綠原酸的含量。美國Warers高效液相色譜儀;481可變波長紫外檢測器;730數(shù)據(jù)處理器;色譜柱:μ-Bondapar C18(3.9×300mm,lOμm);流動(dòng)相:甲醇-1%冰醋酸(27:73);流速:O.8mL/min;檢測波長:329nm;靈敏度:0.1AUFS;紙速:0.2cm/min;室溫25℃;數(shù)據(jù)處理方法為外標(biāo)峰面積法。楊義芳等RP-HPLC法測定胖大海口含片中綠原酸和甘草酸含量。201型液相色譜儀(日本W(wǎng)aters公司);色譜柱YWG C18(300mm×4mm,粒徑10μm);流動(dòng)相綠原酸用甲醇-1%醋酸(23:77);檢測波長326nm;流速0.9mL/min;定量方法用外標(biāo)一點(diǎn)法。張忠春等HPLC法測定金銀花中綠原酸的含量。SP-8800高效液相色譜儀;SP-200型UV檢測器;色譜柱:Sphersorb C18(10μ,4.6mm×250mm)流動(dòng)相:乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87);流速1ml/min,檢鍘波長326nm;柱溫30℃。另外還有用其他條件的,如:熊英等用反相高效液相色譜法測定清解顆粒及金銀花中綠原酸含量。采用島津LC-10A高效液相色譜儀,SPD-10A紫外檢測器,SCL-10 A系統(tǒng)控制器,C-R7A數(shù)據(jù)處理機(jī),DGU-4A脫氣機(jī);色譜柱:島津CLC-ODS 6.0×150mm(5μm);流動(dòng)相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(15:85:0.7:0.15);流速:1.0mL/min;檢測波長:326nm;柱溫:室溫。胡麗君等測定金銀花及其制劑中綠原酸的含量時(shí)采用的也是此方法。張丹等采用HPLC法測定金銀花、茵陳及其1O種中成藥中綠原酸的含量。日本島津LC-3A液相色譜儀;SPD-1型紫外檢測器;分析柱:Shimpack ODS(150mm×6mm);預(yù)柱:YWG C18(30mm×4.6mm);流動(dòng)相:0.2mol/L NaH2PO4-甲醇(75:25,H3PO4調(diào)pH3.2);流速:1.Oml/min;柱溫:35℃;檢測波長:327nm。
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