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諾卡氏菌病專題之干貨!加州鱸諾卡氏菌病困擾你已久?一線漁醫(yī)教你確診和防治

中國水產(chǎn)頻道原創(chuàng)報(bào)道,認(rèn)識(shí)諾卡氏菌病,是每一位加州鱸養(yǎng)殖戶必備的基本功。

能侵害魚類的諾卡氏菌主要有3種,分別為星狀諾卡氏菌)、鰤魚諾卡氏菌)和殺鮭諾卡氏菌)。但據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)和我們的檢測,從珠三角地區(qū)養(yǎng)殖加州鱸分離到的所有諾卡氏菌均為鰤魚諾卡氏菌)。

鰤魚諾卡氏菌,為一種革蘭氏陽性菌,隸屬細(xì)菌屆、放線菌門、放線菌綱、放線菌目、諾卡氏菌科。該菌以腐生為主,專性需氧,具有弱抗酸性,無運(yùn)動(dòng)性,最適溫度25——28℃,最適鹽度0——1.0%,適宜pH范圍5.8——8.5,最適pH為6.5——7.0。

鰤魚諾卡氏菌的菌絲呈桿狀、分枝,長約2——5μm,在宿主病灶處相互交錯(cuò)、聚集成團(tuán)(光學(xué)顯微鏡放大400倍清晰可見)。該菌能在血瓊脂平板、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基等多種培養(yǎng)基中生長,其中,在血平板中生長相對較快,2——5天即可長出明顯菌落;而在腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基生長較慢,需4——10天才能長出明顯菌落;菌落呈白色或淡黃色,砂粒狀,粗糙,邊緣不整齊,有時(shí)表面凸起形成褶皺。

據(jù)相關(guān)研究,鰤魚諾卡氏菌具有多種表型和基因型,其分型與地域差異與宿主關(guān)系不大。Ismail等研究發(fā)現(xiàn),α-葡萄糖苷酶陽性菌株對鹽酸土霉素有抗性,對紅霉素敏感;而α-葡萄糖苷酶陰性菌株對鹽酸土霉素敏感,絕大部分(97.9%)對紅霉素有抗性。據(jù)我們實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部試驗(yàn),分離到的菌株均對氟苯尼考、強(qiáng)力霉素等相對敏感。

從發(fā)病季節(jié)看,珠三角地區(qū)每年4——11月流行,水溫15——32℃均可發(fā)病。其中,一齡魚以10——11月份發(fā)病最為嚴(yán)重,二齡魚以4——5月份最為嚴(yán)重;其他月份(12月——次年2月),諾卡氏菌病為潛伏狀態(tài),一般不會(huì)發(fā)病死魚,但如果氣溫持續(xù)偏暖,也可引起持續(xù)少量死魚。

從發(fā)病規(guī)格看,經(jīng)我們確診的、自然感染諾卡氏菌病的加州鱸最小規(guī)格為全長22cm。大于此規(guī)格的加州鱸,均易感染諾卡氏菌??;而小于此規(guī)格的加州鱸,盡管也有部分病魚會(huì)出現(xiàn)類似諾卡氏菌病的常見癥狀如肝臟白斑等,但此類病魚觀察不到疑似諾卡氏菌菌絲,也分離、培養(yǎng)不到疑似致病菌。

從發(fā)病規(guī)律看,在流行季節(jié),易感規(guī)格的加州鱸均可發(fā)病,在殺蟲、換水、過度投喂等節(jié)點(diǎn)后發(fā)病率極高。一旦發(fā)病,即使徹底治愈,也容易復(fù)發(fā);而且,一旦當(dāng)年發(fā)病,如果不徹底清塘,來年也發(fā)病的概率超過90%。

據(jù)相關(guān)文獻(xiàn),鰤魚諾卡氏菌病的主要病理變化為內(nèi)臟形成黃色或白色結(jié)節(jié)。但是,據(jù)我們檢測,諾卡氏菌病表現(xiàn)的癥狀十分復(fù)雜,不斷有新的病癥出現(xiàn)(如淺表性潰瘍,創(chuàng)口鮮紅);另一方面,也有一些疾病表現(xiàn)出與諾卡氏菌病類似的癥狀(如苗期肝臟白斑等)。

1、活動(dòng)狀態(tài):病魚常見體色偏黑,遲鈍,乏力,浮游于水面。但也有部分病魚活力較強(qiáng)。

2、體表:病魚體表常形成斑點(diǎn)狀出血,濃瘡,或者淺表性潰爛(患處鮮紅)。有時(shí)體表完好,并無異常。

5、鰓:部分病魚鰓絲有大量白色結(jié)節(jié),尤以秋冬季常見;但也有部分病魚鰓絲鮮紅,并無異樣。

7、內(nèi)臟:部分病魚有大量腹水;多數(shù)病魚的肝臟、脾臟、腎臟、心臟、鰾腔表面等有白色結(jié)節(jié),部分病魚腸系膜也有白色結(jié)節(jié);部分病魚在后腎處形成巨大的囊腫物。

正確診斷諾卡氏菌病,就要對諾卡氏菌病的癥狀有深刻、全面的認(rèn)識(shí),并能靈活應(yīng)用光學(xué)顯微鏡,必要時(shí)借助實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。

需要指出,隨著養(yǎng)殖環(huán)境的日益惡化以及盲目用藥,加州鱸諾卡氏菌病出現(xiàn)越來越多的新癥狀,在一線診斷時(shí),應(yīng)仔細(xì)、全面觀察病癥,并結(jié)合顯微鏡觀察情況綜合診斷,必要時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室協(xié)助確診。

1、前者結(jié)節(jié)僅限于脾臟,腎臟常見整體腫大,鏡檢有時(shí)也可見結(jié)節(jié),致病菌在腦心浸液培養(yǎng)基上生長相對較快,圓形,濕潤,邊緣整齊;

2、后者結(jié)節(jié)分布廣泛,致病菌在腦心浸液培養(yǎng)基上生長緩慢,沙粒狀,粗糙,鏡檢呈山丘狀,邊緣不規(guī)則。

廣義上,可借鑒魚病的三環(huán)理論,從改善水體環(huán)境、消滅病原菌、增強(qiáng)魚體體質(zhì)和抗病力著手。

1、改善水體環(huán)境。如合理使用微生態(tài)制劑,使水質(zhì)清爽,確保溶氧充足,為加州鱸營造優(yōu)良的水環(huán)境;

2、消滅病原菌。如棄投冰鮮,切斷食源病原菌,定期使用全效底改、底毒凈等進(jìn)行改底,減少底部致病菌數(shù)量;

3、增強(qiáng)魚體體質(zhì)和抗病力。投喂優(yōu)質(zhì)飼料,或定期內(nèi)服護(hù)肝產(chǎn)品等增強(qiáng)體質(zhì),提高免疫力。

具體可結(jié)合病原菌的生物學(xué)特性(弱抗酸性)以及經(jīng)驗(yàn)(殺蟲、換水或過度投喂等節(jié)點(diǎn)后發(fā)病率極高),從以下三個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)預(yù)防諾卡氏菌病。

鰤魚諾卡氏菌具有弱抗酸性,在弱酸水體更容易獲得生態(tài)優(yōu)勢。到了養(yǎng)殖的中后期階段,由于池塘底部積累了大量的魚類糞便等有機(jī)物,這些有機(jī)物在缺氧狀態(tài)下發(fā)酵產(chǎn)生酸性物質(zhì),加之池塘生物量大,呼吸作用強(qiáng),池塘的水體和底泥往往偏酸,必需人為進(jìn)行調(diào)控。調(diào)控pH的藥物有石灰、小蘇打(碳酸氫鈉)、有益菌等,具體方案應(yīng)在專業(yè)人士的指導(dǎo)下使用。

鰤魚諾卡氏菌是一種條件致病菌,在自然水體、底泥中廣泛存在。根據(jù)我們從一線收集到的信息,殺蟲、換水等節(jié)點(diǎn)后諾卡氏菌病的發(fā)病率明顯高于平時(shí)。其中緣由,殺蟲或換水會(huì)引起水質(zhì)突變和魚體應(yīng)激,造成魚體免疫力下降,給病原菌的入侵或潛伏魚體內(nèi)的病原菌的大量繁殖帶來可乘之機(jī)。

另一方面,據(jù)我們檢測,加州鱸養(yǎng)殖中后期階段直接由寄生蟲引起的病害較為罕見,盡管常能檢測到寄生蟲,但一般數(shù)量不多,絕大多數(shù)都有更重要的病因。因此,殺蟲務(wù)必謹(jǐn)慎,避免盲目殺蟲,如一定要?dú)⑾x,也務(wù)必選擇在天氣穩(wěn)定時(shí)并在專業(yè)人士的指導(dǎo)下進(jìn)行。

鰤魚諾卡氏菌以腐生為主,在腐敗變質(zhì)的冰鮮雜魚中容易大量繁殖。要預(yù)防諾卡氏菌病,首先要選用不帶病原菌的優(yōu)質(zhì)配合飼料,切斷感染的食源途徑;其次,加州鱸攝食易受天氣、光照等影響,波動(dòng)幅度較大,在投喂過程中應(yīng)堅(jiān)持定質(zhì)定量的原則,維持相對穩(wěn)定的投喂量,切忌過飽投喂。否則,一旦攝食過飽,加州鱸消化不良,體質(zhì)亞健康,免疫力下降,很容易感染、爆發(fā)諾卡氏菌病。

此外,據(jù)相關(guān)研究,回歸感染試驗(yàn),腹腔注射感染1周后即出現(xiàn)死亡病例,而口灌及浸泡感染約2周后才出現(xiàn)死魚,這表明鰤魚諾卡氏菌是一種慢性致病菌。因此,平時(shí)巡塘和投喂時(shí)應(yīng)注意觀察魚群狀態(tài)和體表特征,一旦遇到游邊、遲鈍的病魚,應(yīng)仔細(xì)、全面檢查有無諾卡氏菌病癥狀,及時(shí)發(fā)現(xiàn),及時(shí)治療。

在農(nóng)業(yè)部公布的10種抗微生物漁藥中,強(qiáng)力霉素和氟苯尼考對諾卡氏菌的抑殺作用相對較好,但由于諾卡氏菌損傷免疫器官和藥物難以滲透肉芽腫組織觸殺病原菌等原因,治療僅在感染初期有良好效果。

補(bǔ)充說明,部分養(yǎng)殖戶反映,內(nèi)服驅(qū)殺孢子蟲藥——鹽酸氯苯胍有一定效果,能控制病情,具體機(jī)理不詳。

點(diǎn)評2:體表斑點(diǎn)狀出血是加州鱸諾卡氏菌病的典型癥狀之一,由于與教科書上的釘蟲病高度相似,容易被誤診為釘蟲病。實(shí)際上,加州鱸被釘蟲咬傷的地方很少呈鮮紅色。

多種病因可致加州鱸眼睛腫大、凸起,諾卡氏菌病是其中之一,需取眼睛內(nèi)積液鏡檢(400X)即可確診。

點(diǎn)評3:加州鱸體表濃瘡由細(xì)菌感染引起,而且多數(shù)都是諾卡氏菌引起(膿液較粘稠),但也有部分由非諾卡氏菌引起(膿液較稀),取膿液鏡檢(400X)即可區(qū)分。

點(diǎn)評4:屬虹彩病毒也可致類似的淺表性潰爛,但一般創(chuàng)面蒼白,且鏡檢(400X)無諾卡氏菌菌絲。

點(diǎn)評5:目前,據(jù)我們的檢測和相關(guān)文獻(xiàn),加州鱸鰓結(jié)節(jié)的病原僅有諾卡氏菌一種,鰓白色結(jié)節(jié)可作為判斷諾卡氏菌病的特征性癥狀;當(dāng)然,極個(gè)別結(jié)節(jié)的除外。

點(diǎn)評6:偶見部分加州鱸病魚口腔出現(xiàn)潰瘍斑,取其中粘液鏡檢(400X)可見大量交錯(cuò)成團(tuán)的、細(xì)長的、分枝的諾卡氏菌菌絲。但由于不常見,在遇到類似癥狀時(shí)需全面檢測才能確診。

點(diǎn)評7:加州鱸病魚體表有濃瘡,剪開可見白色膿漿,鏡檢(400X)可見大量諾卡氏菌菌絲。與孢子蟲囊孢較為相似,容易誤診。另,曾有學(xué)者報(bào)道加州鱸消化系統(tǒng)感染孢子蟲的病例,但據(jù)我們和同行檢測,加州鱸肌肉、肝脾腎等內(nèi)臟部位均未明確檢出過孢子蟲。

點(diǎn)評8:常見加州鱸肌肉結(jié)節(jié),且全部可觀察或分離到諾卡氏菌,此癥狀可作為判斷諾卡氏菌病的特征性癥狀。

點(diǎn)評9:有時(shí),受藥物等的影響,部分諾卡氏菌病病魚內(nèi)臟并無結(jié)節(jié),僅表現(xiàn)為淺表性潰瘍。此類病魚在長期用藥的池塘中常見。

點(diǎn)評10:常見癥狀,但有時(shí)也可見后腎表面附著一些黃色增生物,此類增生物為壞死的細(xì)胞,檢測不到疑似致病菌,鏡檢(400X)即可區(qū)分。

點(diǎn)評11:后期常見癥狀,但其它一些致病菌如愛德華氏菌也可導(dǎo)致后腎腫大,與諾卡氏菌囊腫物較為相似,鏡檢(400X)即可區(qū)分。

點(diǎn)評12:加州鱸感染諾卡氏菌,首先頭腎會(huì)出現(xiàn)結(jié)節(jié)(鏡檢頭腎有無結(jié)節(jié)可作為早期診斷手段之一),但是需要指出,愛德華氏菌等也會(huì)導(dǎo)致類似的結(jié)節(jié),診斷時(shí)應(yīng)予以注意區(qū)分。

點(diǎn)評13:肝臟白色結(jié)節(jié)也是諾卡氏菌病的典型癥狀之一,但值得指出,苗期階段(全長8——15cm)加州鱸也常見肝臟白斑,而此類病魚普遍虹彩病毒陽性但檢測不到疑似致病菌。

點(diǎn)評14:脾臟出現(xiàn)白色結(jié)節(jié)是加州鱸諾卡氏菌病的典型癥狀之一,但是加州鱸感染愛德華氏菌病后也會(huì)出現(xiàn)脾臟結(jié)節(jié),區(qū)別在于后者的白色結(jié)節(jié)僅限于脾臟和腎臟,而其他部位無。

點(diǎn)評15:嚴(yán)重感染諾卡氏菌病的加州鱸,肝臟、脾臟、腎臟、心臟、腸系膜、鰾腔等均會(huì)出現(xiàn)白色結(jié)節(jié),而其他病害的結(jié)節(jié)一般限于肝臟或脾腎等個(gè)別器官,這也可以作為判斷諾卡氏菌病的特征性癥狀。

點(diǎn)評16:感染諾卡氏菌病的加州鱸心臟表面也可出現(xiàn)大量白色結(jié)節(jié),但某些亞健康的加州鱸心臟表面會(huì)出現(xiàn)個(gè)別脂肪粒,診斷時(shí)應(yīng)注意予以區(qū)別。

點(diǎn)評17:鰤魚諾卡氏菌菌絲細(xì)長、分枝,相互交錯(cuò),結(jié)團(tuán)生長,光學(xué)顯微鏡(400X)下特征非常明顯,與其它致病菌有顯著的區(qū)別。在診斷加州鱸諾卡氏菌病時(shí),應(yīng)充分利用光學(xué)顯微鏡,取病灶組織制成薄涂片觀察,以提高正確診斷率。

圖18:加州鱸諾卡氏菌病-病灶大量諾卡氏菌絲,呈細(xì)長、分枝狀,革蘭氏染色陽性(400X)

點(diǎn)評18:據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)資料和我們實(shí)驗(yàn)室檢測,危害加州鱸的致病菌中,屬于革蘭氏陽性菌的僅有鰤魚諾卡氏菌。結(jié)合革蘭氏染色,可進(jìn)一步確診加州鱸諾卡氏菌病。但應(yīng)注意革蘭氏染色假陽性現(xiàn)象。

圖19:加州鱸諾卡氏菌病-病灶大量諾卡氏菌絲,呈細(xì)長、分枝狀,革蘭氏染色陽性(400X)

點(diǎn)評20:鰤魚諾卡氏菌的生長速度偏慢,在腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基上的菌落特征非常明顯,呈砂粒狀、粗糙、邊緣不規(guī)則,可作為判斷諾卡氏菌病的特征之一。

點(diǎn)評21:光學(xué)顯微鏡下(40X),鰤魚諾卡氏菌呈棕灰色,山丘狀,邊緣不整齊,與其他水產(chǎn)致病菌菌落的差異非常大,也可作為確診諾卡氏菌病的特征性依據(jù)。

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