在細胞培養(yǎng)過程中,總有一些細胞因為各種原因死亡。活細胞占總細胞的百分比稱為細胞活力。細胞活力檢測是細胞培養(yǎng)過程中不可缺少的過程。一般需要檢查從組織中分離出來的細胞的存活力,以了解分離過程是否對細胞有損傷;復(fù)蘇后,還應(yīng)檢查細胞的活力,以達到解凍復(fù)蘇的效果。制備細胞懸液后,細胞用活性染料錐蟲藍染色,并計數(shù)。
細胞實驗培養(yǎng)過程中,正常細胞的膜是完整的,臺盼藍不能穿透正常完整的活細胞膜,所以活細胞不染色;而失去活性或細胞膜不完整的細胞細胞膜通透性增加,錐蟲藍可以進入細胞使其著色(藍色)。
在細胞實驗過程中,細胞活力檢測的操作步驟如下:
1.制備4%錐蟲藍母液:稱取4g錐蟲藍,加入少量蒸餾水,研磨,加入雙蒸水至100mL,用濾紙過濾,4℃保存。使用時,用PBS稀釋至0.4%。
2.胰酶消化貼壁細胞制備單細胞懸液,適當稀釋(106細胞/毫升)。
3.將少量細胞懸液與0.4%錐蟲藍溶液以9:1的比例混合,輕吹混勻,染色2~3min。
4.顯微鏡下觀察,死細胞呈淡藍色,腫脹,無光澤;活細胞保持正常形狀,無色透明有光澤。如果有必要計算活細胞率,將染色的細胞懸液滴入細胞計數(shù)板進行計數(shù)。
活細胞率(%) =活細胞總數(shù)/(活細胞總數(shù)+死細胞總數(shù))×細胞總數(shù)
注意:臺盼藍染色細胞時,時間不宜過長。否則,一些活細胞會被染色,這會干擾計數(shù)的準確性。
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