質(zhì)粒圖譜為質(zhì)粒DNA序列的物理圖譜，提供了包括質(zhì)粒的大小、篩選標(biāo)記、克隆位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄及翻譯元件等信息，為我們選擇質(zhì)粒、了解質(zhì)粒特點(diǎn)及應(yīng)用提供了重要依據(jù)。

如何來閱讀質(zhì)粒圖譜？

各種英文字母有什么含義？

哪些信息又是我們有必要了解的呢？

今天教你四步，快速掌握質(zhì)粒圖譜。

建議在Wifi環(huán)境下觀看，土豪請隨意

看懂質(zhì)粒圖譜的4個(gè)要點(diǎn)↓↓

復(fù)制起點(diǎn)，它控制著質(zhì)粒的復(fù)制，并決定了質(zhì)粒的宿主和拷貝數(shù)。 篩選標(biāo)記，了解篩選標(biāo)記類型，方便后續(xù)確定篩選重組質(zhì)粒載體的方法。 多克隆位點(diǎn)，既外源基因的插入位點(diǎn)。 其他元件，如轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、翻譯表達(dá)元件和蛋白標(biāo)簽等。

第1步 了解質(zhì)粒圖譜中的復(fù)制起點(diǎn)

圖譜中的ori表示質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)。質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)決定了質(zhì)粒的宿主及質(zhì)粒的拷貝數(shù)相關(guān)，它是質(zhì)粒中的一段特定序列，富含AT和重復(fù)序列。

Tips：

圖譜上只有一個(gè)ori，表示質(zhì)粒是原核克隆及表達(dá)質(zhì)粒 圖譜上有兩個(gè)ori，則表示該質(zhì)粒是穿梭質(zhì)粒，既可以在原核也可以在真核中復(fù)制

第2步 了解質(zhì)粒圖譜中的篩選標(biāo)記

圖譜中的AmpR、KanaR等表示質(zhì)粒載體中的篩選標(biāo)簽，多為抗生素抗性基因，方便后續(xù)通過抗生素篩選陽性克隆。特點(diǎn)是單詞最后會以大寫R或上標(biāo)r結(jié)束。

Tips：

只在一種宿主中復(fù)制的質(zhì)粒僅具有一種抗性篩選標(biāo)記，如原核克隆載體和原核表達(dá)載體 能夠在兩種類型宿主中復(fù)制和表達(dá)的載體會具有兩種篩選標(biāo)記，如穿梭質(zhì)粒

第3步 了解質(zhì)粒圖譜中的多克隆位點(diǎn)

圖譜中的MCS或者許多內(nèi)切酶排排坐的部分，就是質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)。多克隆位點(diǎn)為一系列限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)，是外源DNA的插入位點(diǎn)，一般可通過酶切/連接的方式將外源DNA插入質(zhì)粒。

Tips：

位于轉(zhuǎn)錄啟動和轉(zhuǎn)錄終止信號之間 所包含的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)數(shù)量和組成因載體不同會有所差異 其中的酶切位點(diǎn)在質(zhì)粒中為單一的酶切位點(diǎn) 使用時(shí)需注意質(zhì)粒載體與外源DNA酶切位點(diǎn)的兼容性問題

第4步 看看質(zhì)粒圖譜中還有哪些有用的信息

質(zhì)粒載體中除復(fù)制起始位點(diǎn)、篩選標(biāo)記、多克隆位點(diǎn)外，還具有其他一些表達(dá)或調(diào)控元件，如轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、翻譯調(diào)控元件和融合表達(dá)標(biāo)簽蛋白等。

蛋白純化標(biāo)簽蛋白：His-Tag，GST-tag等 蛋白檢測標(biāo)簽蛋白：Myc-Tag，F(xiàn)lag-Tag，HA-Taq等 熒光蛋白表達(dá)標(biāo)簽：GFP，mCherry等

到了這里，質(zhì)粒圖譜的修煉已基本完成了~~

來源: 公眾號“TIANGEN”（微信號：TIANGEN_BIOTECH）

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