P3實(shí)驗(yàn)室是廣東省第二人民醫(yī)院“手撕病毒”的秘密武器之一。這里每天進(jìn)行400多項(xiàng)新冠肺炎肺炎核酸檢測(cè)。病毒是如何在P3實(shí)驗(yàn)室被“發(fā)現(xiàn)”的？讓經(jīng)濟(jì)日?qǐng)?bào)-中國(guó)經(jīng)濟(jì)網(wǎng)記者帶您揭開(kāi)我院P3實(shí)驗(yàn)室的神秘面紗。

“這是一個(gè)‘零距離’接觸病毒的地方。整個(gè)實(shí)驗(yàn)室完全密封，房間處于負(fù)壓狀態(tài)。我們喜歡用‘三流’來(lái)形容，即人、物流、空氣的單向流動(dòng)，以保證里面的污染物不會(huì)泄漏出去，造成污染?！睆V東省第二人民醫(yī)院P3實(shí)驗(yàn)室主任林建國(guó)說(shuō)。

“這里”指的是P3實(shí)驗(yàn)室。廣東省第二人民醫(yī)院每天進(jìn)行400多項(xiàng)新冠肺炎肺炎核酸檢測(cè)。廣東省第二人民醫(yī)院作為國(guó)內(nèi)第一家省級(jí)急救醫(yī)院，擁有WHO國(guó)際急救醫(yī)療隊(duì)，具有豐富的抗病毒治療經(jīng)驗(yàn)。P3實(shí)驗(yàn)室是“手撕病毒”的秘密武器之一。

實(shí)驗(yàn)者通過(guò)核酸擴(kuò)增器進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

所有人都是凡人

P3實(shí)驗(yàn)室是生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的簡(jiǎn)稱(chēng)，P是防護(hù)的簡(jiǎn)稱(chēng)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)室完全密封，內(nèi)部處于負(fù)壓狀態(tài)，這樣內(nèi)部氣體就不會(huì)泄漏到外面造成污染，也就是“空氣流”的單向流動(dòng)。

根據(jù)微生物及其毒素的危害程度，生物安全實(shí)驗(yàn)室分為四級(jí):一級(jí)最低，四級(jí)最高。一級(jí)實(shí)驗(yàn)室適用于對(duì)健康成人無(wú)致病作用的微生物；第二級(jí)適用于對(duì)人和環(huán)境有中等潛在危害的微生物；第三級(jí)適用于主要通過(guò)呼吸道感染嚴(yán)重甚至致命疾病的病原微生物或其毒素；四級(jí)適用于對(duì)人體高度危險(xiǎn)、通過(guò)氣溶膠傳播或傳播途徑不明，且無(wú)有效疫苗或治療方法的病原微生物或其毒素。

廣東省第二人民醫(yī)院新型冠狀病毒核酸檢測(cè)在P3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。這個(gè)P3實(shí)驗(yàn)室的口號(hào)是3P，平戰(zhàn)結(jié)合，與時(shí)俱進(jìn)。平戰(zhàn)結(jié)合:平時(shí)以科研為主，定期進(jìn)行應(yīng)急演練。一旦發(fā)生疫情，將立即開(kāi)展應(yīng)急工作。警鐘長(zhǎng)鳴:時(shí)刻保持清醒的頭腦，密切關(guān)注全球和國(guó)內(nèi)傳染病研究動(dòng)態(tài)，防患于未然。與時(shí)俱進(jìn):及時(shí)跟進(jìn)國(guó)際新知識(shí)、新技術(shù)、新設(shè)備，建設(shè)具有國(guó)際視野的實(shí)驗(yàn)室。

從繭中抽絲——進(jìn)行艱苦的調(diào)查

核酸檢測(cè)是新冠肺炎診斷肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”，檢測(cè)過(guò)程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)都很微妙，容不得半點(diǎn)馬虎。在操作中，實(shí)驗(yàn)者面對(duì)面前的樣本需要“一個(gè)個(gè)揭開(kāi)樣本，提取核酸”，這無(wú)疑是與病毒的正面對(duì)抗。

那么，P3實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)者是如何與病毒“戰(zhàn)斗”的呢？根據(jù)介紹，實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)過(guò)程可以分為五個(gè)步驟:樣品進(jìn)入“傳遞窗口”——滅活處理——開(kāi)蓋取芯——擴(kuò)增反應(yīng)判斷結(jié)果——高壓滅菌。

第一步是樣品進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。在進(jìn)入P3實(shí)驗(yàn)室之前，采集的測(cè)試樣品必須進(jìn)入一個(gè)特殊的窗口——“傳遞窗口”，也稱(chēng)為空氣閘。它有不能同時(shí)打開(kāi)的雙門(mén)，以保證樣品轉(zhuǎn)移時(shí)帶入的空氣體在雙門(mén)內(nèi)被隔離，從而不污染實(shí)驗(yàn)室外的環(huán)境。樣本將在這里的實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始它短暫的生命。

第二步是檢測(cè)前滅活。將樣品在56℃水浴中滅活半小時(shí)，使病毒蛋白不再具有生理活性，失去感染、致病和繁殖的能力。這使得檢測(cè)相對(duì)安全，但病毒蛋白的基因序列不受影響。

第三步是檢測(cè)的核心環(huán)節(jié)——開(kāi)蓋加樣提取核酸。

我院檢驗(yàn)科副主任技師胡良山是第一個(gè)進(jìn)入P3負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室完成設(shè)備調(diào)試、程序設(shè)置、試劑試用等準(zhǔn)備工作的人?！霸跇?biāo)本處理室，當(dāng)實(shí)驗(yàn)者拿到滅活的樣本時(shí)，第一個(gè)動(dòng)作是振蕩，讓拭子上的病毒盡可能多地在培養(yǎng)基溶液中洗脫，然后靜置5分鐘沉淀。下一步是開(kāi)蓋加樣，必須人工操作，需要兩個(gè)人的高度配合才能完成。一個(gè)人擰開(kāi)樣品罐的蓋子，另一個(gè)人拿著微量吸管吸取樣品罐中的微量溶液，放入另一個(gè)提取管中，然后擰上管套?！彼榻B說(shuō)，這樣，400多個(gè)樣本要被打開(kāi)、吸吮、轉(zhuǎn)移400多次，每次都被實(shí)驗(yàn)者與病毒面對(duì)面地“打開(kāi)、撕扯”。

“病毒在脫帽和轉(zhuǎn)移過(guò)程中非常容易暴露在實(shí)驗(yàn)室空氣體中。”胡梁山說(shuō):“打開(kāi)蓋子加樣時(shí)，拿著微量移液器的手往往因?yàn)榇髁穗p層手套而顯得別扭，但要小心。再加上眼罩、面罩、生物安全柜玻璃窗三重屏障，一切動(dòng)作顯得緩慢。由于動(dòng)作緩慢，手不時(shí)顫抖。往往是左手握著右手完成加樣?！?/p>

人工提取核酸的步驟比較復(fù)雜，考驗(yàn)實(shí)驗(yàn)者的耐心和謹(jǐn)慎?！昂怂崽崛】梢杂脙x器輔助，但由于需要比較，往往需要人工操作，需要重復(fù)離心、加試劑、洗滌等10多個(gè)步驟。其中，打開(kāi)管套的操作是7次以上，大約需要50分鐘完成一次人工核酸提取。”胡梁山說(shuō)。

第四步，判斷結(jié)果。提取的核酸被送到核酸檢測(cè)室，并被放在儀器上。實(shí)驗(yàn)者將提取的核酸加入到擴(kuò)增試劑中，用熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，分析判斷結(jié)果是陰性還是陽(yáng)性需要110分鐘左右。

最后，污染物的高壓滅菌處理。高壓滅菌后，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的污染物作為普通醫(yī)療廢物處理。

安全防護(hù)

讓我們看看員工是如何工作的。

一、清潔區(qū)穿中級(jí)防護(hù)服——通過(guò)緩沖室進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室負(fù)壓車(chē)間，樣品在緩沖室處理，核酸提取檢測(cè)——完成后進(jìn)行空室和表面消毒，依次脫下防護(hù)服，通過(guò)淋浴室換衣，返回清潔區(qū)。這些步驟都不能省略。

核酸檢測(cè)的目的是高效、有序和安全。其中，工作人員的安全最為重要。為了確保安全，醫(yī)院采取了各種措施。一是人員篩選，抗疫動(dòng)員令下達(dá)后，很多人踴躍報(bào)名，經(jīng)過(guò)多次篩選，留下的都是身體健康、訓(xùn)練有素的年輕“老兵”；二、崗前安全培訓(xùn)，嚴(yán)格按照要求穿戴防護(hù)服，熟悉操作流程；第三，嚴(yán)格執(zhí)行消毒滅菌制度。醫(yī)院P3實(shí)驗(yàn)室管理員閻秀奎負(fù)責(zé)日常消毒工作；第四，建立感覺(jué)控制主管制度，及時(shí)發(fā)現(xiàn)負(fù)壓區(qū)工作人員的不適或操作不當(dāng)，保證工作人員的身心安全。

到目前為止，我院P3實(shí)驗(yàn)室尚未出現(xiàn)生物安全問(wèn)題。

拋棄虛假，保留真實(shí)

在P3實(shí)驗(yàn)室，任何環(huán)節(jié)的任何問(wèn)題都可能導(dǎo)致“假陰性”或“假陽(yáng)性”。為了保證檢測(cè)質(zhì)量，檢測(cè)結(jié)果會(huì)經(jīng)過(guò)多次比對(duì)和復(fù)核。

據(jù)報(bào)道，檢測(cè)質(zhì)量的保證措施在檢測(cè)前已經(jīng)開(kāi)始。采集樣本的醫(yī)務(wù)人員必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的培訓(xùn)和考試后才能上崗。樣品的質(zhì)量與采集技術(shù)密切相關(guān)，每一幀的動(dòng)作流程都必須按規(guī)定進(jìn)行。樣品采集后的押運(yùn)工作應(yīng)由專(zhuān)人按照嚴(yán)格的程序送到實(shí)驗(yàn)室。

在測(cè)試過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)者認(rèn)真對(duì)待每一項(xiàng)測(cè)試，不遺漏任何可疑樣本。對(duì)于可疑樣品，將選擇不同的試劑進(jìn)行審查，以防止“假陰性”；同時(shí)在每批實(shí)驗(yàn)中隨機(jī)插入3 空個(gè)以上的白色對(duì)照，對(duì)陽(yáng)性樣本進(jìn)行病毒基因測(cè)序比對(duì)，防止出現(xiàn)“假陽(yáng)性”。

檢測(cè)結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)室會(huì)定期隨機(jī)抽取檢測(cè)樣本送第三方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析，以保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

一前一后橫掃一切

目前，我院共有21支P3檢測(cè)隊(duì)，被稱(chēng)為“偵察兵”。其中70%以上具有碩士以上學(xué)歷，均接受過(guò)分子生物學(xué)培訓(xùn)，持有PCR工作證書(shū)。

“不像病房里打架的醫(yī)護(hù)人員，他們藏在實(shí)驗(yàn)室里，每天都與病毒密切接觸，是別人看不到的‘前線(xiàn)’?！绷纸▏?guó)說(shuō)。

據(jù)悉，實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格遵守《新型冠狀病毒診療方案》和生物安全要求，檢查人員應(yīng)在P3實(shí)驗(yàn)室負(fù)壓封閉室空佩戴中級(jí)防護(hù)裝備，5小時(shí)內(nèi)不得進(jìn)食或飲水，并克服負(fù)壓差和設(shè)備過(guò)緊引起的頭暈、嘔吐等癥狀。

不僅如此，核查人員還必須克服他們的心理恐懼。咽拭子樣本采集自疑似患者鼻咽部，可能含有較多SARS-CoV-2。當(dāng)檢查人員從采樣罐中取出樣本時(shí)，病毒在空氣體的幫助下很容易在封閉的環(huán)境中傳播，但他們?nèi)匀缓翢o(wú)怨言、無(wú)怨無(wú)悔地戰(zhàn)斗在第一線(xiàn)，并率先通過(guò)。