本文主要研究實(shí)驗(yàn)室光照對(duì)經(jīng)典培養(yǎng)基和血清的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，光照會(huì)對(duì)DMEM介質(zhì)產(chǎn)生有害影響。與未暴露的DMEM培養(yǎng)基相比，暴露的DMEM培養(yǎng)基的細(xì)胞產(chǎn)量?jī)H為10~40%，細(xì)胞生長(zhǎng)能力的下降主要是由于光化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的有毒物質(zhì)。胎牛血清對(duì)光有很強(qiáng)的穩(wěn)定性。而且，血清和培養(yǎng)基一起使用時(shí)，血清也能在一定程度上保護(hù)培養(yǎng)基，使細(xì)胞的生長(zhǎng)能力不受光照后培養(yǎng)基降解的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

一個(gè)

1.光對(duì)DMEM介質(zhì)性能的影響

在細(xì)胞培養(yǎng)之前，將DMEM培養(yǎng)基暴露于特定強(qiáng)度的暖熒光燈下48小時(shí)。在每個(gè)培養(yǎng)條件下進(jìn)行三次平行培養(yǎng)，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)確定細(xì)胞產(chǎn)量。

當(dāng)培養(yǎng)基暴露于105 dekalux光強(qiáng)時(shí)，與對(duì)照培養(yǎng)基相比，實(shí)驗(yàn)組三種細(xì)胞系的細(xì)胞增殖水平下降了20% ~ 35%，但在置于半透明黃色袋中的培養(yǎng)基中，細(xì)胞生長(zhǎng)沒有下降趨勢(shì)(見圖1和圖2)。

圖1光對(duì)培養(yǎng)基的影響

注意:

2.光照對(duì)胎牛血清性能的影響

在對(duì)細(xì)胞產(chǎn)量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性評(píng)估之前，將胎牛血清在105度光照下暴露24至48小時(shí)。之后，通過增加暴露時(shí)間來(lái)測(cè)試胎牛血清的相對(duì)穩(wěn)定性極限。在暴露于105 dekalux 21天后，通過細(xì)胞產(chǎn)量試驗(yàn)測(cè)量血清的性能。3T3和BHK-21細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)量與對(duì)照組相似，而AIF細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)量略有下降(見圖3)

圖3光對(duì)胎牛血清性能的影響

注:(一)AIF雜交瘤細(xì)胞

(二)BALB/3T3細(xì)胞

BHK-21 (C-13)細(xì)胞。

接下來(lái)，將細(xì)胞在無(wú)光照的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并加入10%胎牛血清，然后分別測(cè)試不同保存條件下對(duì)應(yīng)于血清的細(xì)胞產(chǎn)量。對(duì)照組血清保存條件為:22℃，避光保存21天；實(shí)驗(yàn)組血清保存條件為22℃，暴露于105 dekalux 21天。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，輻照后的胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)性能沒有明顯下降。

克隆率是一個(gè)更敏感的實(shí)驗(yàn)，用于比較未暴露和暴露血清的細(xì)胞培養(yǎng)性能。在暴露于105 dekalux 28天后，胎牛血清的克隆率數(shù)據(jù)顯示細(xì)胞培養(yǎng)性能下降(見圖4)。

圖4光和溫度對(duì)胎牛血清性能的影響

◆◆◆

結(jié)論

一個(gè)

當(dāng)暴露在熒光燈下時(shí)，DMEM培養(yǎng)基支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力急劇下降，這主要?dú)w因于兩種機(jī)制:①維生素B2的光活化導(dǎo)致色氨酸自由基的產(chǎn)生和過氧化物的形成[1，2]，②維生素B2和色氨酸的光加成產(chǎn)物的形成[3]。另外，細(xì)胞生長(zhǎng)能力的下降與光照劑量有關(guān):光照強(qiáng)度越大或光照時(shí)間越長(zhǎng)，下降越明顯。

此外，我們還研究了實(shí)驗(yàn)室光照對(duì)胎牛血清的影響。血清的保護(hù)作用是由于血清中的過氧化氫酶活性，可以切斷自由基介導(dǎo)的反應(yīng)[1]。但用克隆率衡量細(xì)胞培養(yǎng)性能時(shí)，血清在光照和室溫下長(zhǎng)期保存會(huì)導(dǎo)致其培養(yǎng)性能下降。

小費(fèi)

★細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)一般都是避光覆蓋！

★預(yù)防措施包括:

①用黃色袋子蓋住培養(yǎng)基瓶；

②在儲(chǔ)存區(qū)和實(shí)驗(yàn)室用黃管遮擋熒光，盡量減少培養(yǎng)基和血清在熒光波長(zhǎng)范圍內(nèi)的暴露。

★當(dāng)血清需要長(zhǎng)時(shí)間暴露于光或反復(fù)短期暴露時(shí)，也可參考上述預(yù)防措施，抑制光的有害作用。

引用的文獻(xiàn)

1.過氧化氫作為光產(chǎn)物對(duì)人細(xì)胞毒性的鑒定。體外14，715-722 (1978)。

2.光誘導(dǎo)色氨酸-核黃素加合物對(duì)F9畸胎瘤細(xì)胞和植入前小鼠胚胎的毒性作用。國(guó)際。《美國(guó)營(yíng)養(yǎng)雜志》58，394- 401 (1988)。

3.王若珍，「日光」螢光在組織培養(yǎng)液中對(duì)人體細(xì)胞的致死效應(yīng)。光化學(xué)和光生物學(xué)21，373-375 (1975)。