羅氏電化學(xué)發(fā)光免疫分析總結(jié)

　　技術(shù)是羅氏公司開發(fā)的，但全自動(dòng)機(jī)械制造卻由日本的日立公司承擔(dān)，所以儀器上還有Hitachi的標(biāo)志。這個(gè)儀器讓大家吃驚的一大原因就在于一直在實(shí)驗(yàn)室研究的電致化學(xué)發(fā)光居然已經(jīng)真正地產(chǎn)業(yè)化了，其中我們一直無法解決的諸多問題（尤其是重現(xiàn)性）均已得到解答，看來羅氏的確花了不少心血開發(fā)這款儀器。

　　羅氏電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的性能特點(diǎn)——?jiǎng)?chuàng)新的技術(shù)，與眾不同

　　一、最先進(jìn)的檢測原理

　　電化學(xué)發(fā)光免疫測定，是目前最先進(jìn)的標(biāo)記免疫測定技術(shù)，是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫測定以后的新一代標(biāo)記免疫測定技術(shù)，具有敏感、快速和穩(wěn)定的特點(diǎn)，在固相標(biāo)記免疫測定中技術(shù)上居領(lǐng)先地位。 電化學(xué)發(fā)光（ECL）是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，實(shí)際上是電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過程的完美結(jié)合。電化學(xué)發(fā)光與普通化學(xué)發(fā)光的主要差異在于前者是電啟動(dòng)發(fā)光反應(yīng)，循環(huán)及多次發(fā)光，后者是通過化合物混合啟動(dòng)發(fā)光反應(yīng)，是單次瞬間發(fā)光。因此ECL反應(yīng)易精確控制，重復(fù)性極好。

　　電化學(xué)發(fā)光免疫測定是電化學(xué)發(fā)光（ECL）和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物，直接以[Ru(bpy)3]2+標(biāo)記抗體，反應(yīng)時(shí)標(biāo)記物直接發(fā)光。且[Ru(bpy)3]2+在電極表面的反應(yīng)過程可以周而復(fù)始進(jìn)行，產(chǎn)生許多光子，使光信號(hào)得以增強(qiáng)。

　　二、專利的包被技術(shù)

　　鏈霉親和素（streptoavidin，SA）和生物素（biotin，B）是具有很強(qiáng)的非共價(jià)相互作用的一對(duì)化合物，特異性強(qiáng)且結(jié)合緊密。一分子SA可與四分子B相結(jié)合，增大了抗體結(jié)合量，達(dá)到放大效果。在ECL的試劑中，SA通過特殊的蛋白結(jié)合物均勻牢固地包被在磁性微粒上，形成通用的能與B結(jié)合的固相載體，另一試劑為活化的B衍生物化合的抗原或抗體。兩種試劑混合時(shí)，抗原或抗體即包被在磁性微粒上。

　　三、獨(dú)特的載體

　　ECL中采用的固相載體是帶有磁性的直徑約2.8?m的聚苯乙烯微粒。其特點(diǎn)是反應(yīng)面積極大，比板式擴(kuò)大20－30倍，使反應(yīng)在近乎液相中進(jìn)行，反應(yīng)速度大大加快，利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結(jié)合態(tài)和游離態(tài)，方便迅速，實(shí)現(xiàn)了精確的全自動(dòng)化。

　　四、獨(dú)到的磁分離技術(shù)

　　實(shí)現(xiàn)了結(jié)合相和游離相的完全自動(dòng)化分離，且檢測池在無電場時(shí)徹底清洗，避免了交叉污染。

　　五、超高的測定靈敏度和測定線性

　　發(fā)光信號(hào)檢測的寬線性加上電化學(xué)發(fā)光獨(dú)特的標(biāo)記物本身（發(fā)光底物）循環(huán)發(fā)光和專利的'鏈霉親和素-生物素包被技術(shù)的信號(hào)放大作用，使電化學(xué)發(fā)光測定的檢測下限可達(dá)10-12和10-18級(jí)，線性范圍最大超越7個(gè)數(shù)量級(jí)，在待測抗原（抗體）極微量或達(dá)到病理期極限時(shí)，均能準(zhǔn)確測定，避免了樣本稀釋重測定，既節(jié)約時(shí)間，又節(jié)省試劑。

　　六、穩(wěn)定的試劑

　　電化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物三聯(lián)吡啶釕在無電場和遞電子體（三丙胺）存在的自然環(huán)境下非常穩(wěn)定，保證了用它標(biāo)記的抗體（抗原）試劑也非常穩(wěn)定，2－8℃可穩(wěn)定一年以上，批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為<4%和<7%，在首日使用之后也可以穩(wěn)定3個(gè)月。

　　七、簡便創(chuàng)新的定標(biāo)概念

　　每個(gè)測定項(xiàng)目的基本定標(biāo)曲線已由羅氏公司完成，并已存入試劑的二維條形碼，自動(dòng)讀入儀器，用戶只需進(jìn)行二點(diǎn)重定標(biāo)即可。

　　八、簡便穩(wěn)妥的二維條形碼——當(dāng)代最先進(jìn)的全自動(dòng)信息處理技術(shù)

　　二維條形碼是電化學(xué)發(fā)光分析儀的“信息高速公路”，可以存儲(chǔ)超過一千字節(jié)的信息，使同批試劑僅做一次2點(diǎn)定標(biāo)，亦使儀器自動(dòng)化程度升高，不必做大量的定標(biāo)、質(zhì)控等前期工作，廠家已做12點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線，既節(jié)約時(shí)間，又保障結(jié)果的準(zhǔn)確。

　　九、先進(jìn)的閃爍存儲(chǔ)技術(shù)

　　斷電時(shí)軟件數(shù)據(jù)永不丟失，避免硬盤損壞，導(dǎo)致系統(tǒng)崩潰，啟動(dòng)速度比硬盤快10倍。

　　十、廣泛的應(yīng)用范圍和廣闊的開發(fā)前景

　　檢測項(xiàng)目廣泛應(yīng)用于甲狀腺、性激素、骨代謝、心肌梗塞、腫瘤標(biāo)志物、傳染病抗原抗體等的定量測定。

　　ECL分析原理中采用三聯(lián)吡啶釕作為標(biāo)記物，其活化衍生物是三聯(lián)吡啶釕＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS）。該衍生物性能穩(wěn)定，且分子量很小，產(chǎn)生的空間位阻小，與免疫球蛋白的分子比超過20仍不會(huì)影響抗體的可溶性和免疫活性，因此它可與抗體、半抗原、激素、核酸等各種生物分子結(jié)合形成穩(wěn)定的標(biāo)記物，使檢測的菜單大大豐富，為其檢測菜單的開發(fā)前景提供了廣闊空間。 羅氏收購寶靈曼后，設(shè)有專職的研發(fā)部門為電化學(xué)發(fā)光分析儀開發(fā)配套試劑，所以每年都會(huì)有5－10個(gè)新項(xiàng)目問世，為用戶的項(xiàng)目拓展奠定了基礎(chǔ)。