1、從基因文庫中獲取目的基因；2、cDNA文庫；3、反轉(zhuǎn)錄法；4、人工合成法。目的基因，也稱靶標(biāo)基因，是指在實(shí)驗(yàn)中研究或操縱的特定基因。在基因克隆過程中目的基因就是要分離、純化、克隆并轉(zhuǎn)化到生物體的那個(gè)可以帶來預(yù)期表型性狀如抗蟲或耐除草劑的基因。

目的基因獲得方法是取得含有所需生物學(xué)功能或編碼所需產(chǎn)物結(jié)構(gòu)基因的DNA片段的方法。1969年貝克威思等從大腸桿菌中分離出了乳糖操縱子DNA，以后有不少科學(xué)家用生物學(xué)方法、物理化學(xué)方法分離出許多純化的基因。但總的來看為數(shù)不多。

1970年首次完成了77對堿基的酵母丙氨酸t(yī)RNA基因的全合成；1973年又合成了126對堿基的酪氨酸t(yī)RNA的結(jié)構(gòu)基因。但上述兩次合成的基因都不能得到表達(dá)。1976年8月成功地合成了能表達(dá)功能的人工基因——193對堿基的大腸桿菌酪氨酸t(yī)RNA基因。自此以后人工合成基因的報(bào)道不斷出現(xiàn)。