產(chǎn)品簡(jiǎn)介本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠模吸附技術(shù)，高效專一地結(jié)合質(zhì)粒DNA。同時(shí)采用特殊的 溶液P4和過(guò)濾器CS1，可有效的出去內(nèi)毒素、蛋白質(zhì)雜志；整個(gè)提取過(guò)程僅需1h，方便快捷。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接、轉(zhuǎn)化和細(xì)胞轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞等試驗(yàn)。推薦每次菌液使用量：高拷貝質(zhì)粒推薦使用量為100ml，得率一般在500-1500μg左右；低拷貝質(zhì)粒推薦使用量為200ml，得率一般在200-600μg左右。注意事項(xiàng)：請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。溶液P1在使用前先加入RNase A 加入2.5ml的平衡液BL，8000rpm離心2min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。。取100ml過(guò)夜培養(yǎng)的菌液加入離心管，室溫8000rpm離心3min收集菌液，盡量吸除上清。注意：菌液較多時(shí)候可以通過(guò)幾次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中，菌液量以能夠充分裂解為佳，菌液過(guò)多會(huì)導(dǎo)致裂解不充分從而降低質(zhì)粒的提取效率。盡量吸除上清，為確保上清液全部吸除，請(qǐng)用干凈的吸水紙吸去瓶壁上的水滴。向留有菌體沉淀的離心管中加入8ml溶液P1，使用移液器或渦旋振蕩器徹底裂解懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。注意：請(qǐng)務(wù)必徹底懸浮細(xì)菌沉淀，如果有未徹底混勻的菌塊，會(huì)影響裂解效果，導(dǎo)致提取量和純度偏低，對(duì)于低拷貝質(zhì)粒，加大菌體用量的同時(shí)按比例增加P1、P2、P4的用量。向離心管中加入8ml溶液P2，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6~8次，室溫放置5min。注意：溫和地混勻，不要?jiǎng)×艺鹗?，以免污染基因組DNA。此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠，如果未變得清亮，可能由于菌體過(guò)多，裂解不徹底，應(yīng)減少菌體量。向離心管中加入8ml溶液P4，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6~8次，充分混勻，至溶液出現(xiàn)白色分散絮狀沉淀。然后室溫放置10min左右。8000rpm離心5-10min，使白色沉淀離至管底，將全部溶液小心倒入過(guò)濾器CS1中，慢慢推動(dòng)推柄過(guò)濾，濾液收集在干凈的50ml的管中。注意：加入溶液P4后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果離心后倒入過(guò)濾器CS1中的溶液有白色沉淀也不會(huì)影響過(guò)濾，如果菌體過(guò)多，推薦延長(zhǎng)離心時(shí)間至20-30min。向?yàn)V液中加入0.3倍濾液體積的異丙醇，上下顛倒混勻后轉(zhuǎn)移到吸附柱CP6中。注意：過(guò)濾后濾液會(huì)損失，根據(jù)損失的不同請(qǐng)加入不同體積的異丙醇，吸附柱CP6的最大容積為15ml，所以需要分2次過(guò)柱。室溫8000rpm離心2min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP6重新放回收集管中。注意：將第7步中所得溶液分2次過(guò)柱，每次均按以上條件操作。向吸附柱CP6中加入10ml漂洗液PW，8000rpm離心2min，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。重復(fù)操作步驟9。向吸附柱CP6中加入3ml無(wú)水乙醇，8000rpm離心2min，倒掉廢液。將吸附柱CP6重新放回收集管中，8000rpm離心5min，

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