簡介:

視頻介紹了一種生產(chǎn)偽病毒顆粒的方法，偽病毒顆粒是在與高致病性病毒中東呼吸綜合征和嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒的尖峰蛋白融合的BSL-2環(huán)境中產(chǎn)生的。這些假病毒顆粒含有熒光素酶報告基因，可用于定量確定病毒進入靶宿主細胞。

摘要:

根據(jù)該方法，將可廣泛獲得的HEK-293T細胞系用于轉(zhuǎn)染程序，以產(chǎn)生具有鼠白血病病毒(MLV)核心和熒光素酶報告基因的冠狀病毒(CoV)尖峰融合蛋白假病毒顆粒。一旦這些假病毒顆粒形成并從生產(chǎn)細胞中釋放出來，就會添加熒光素酶報告基因。因為它們的表面只含有異源冠狀病毒的尖峰蛋白，所以這些病毒顆粒類似于病毒進入其天然冠狀病毒的對應物。因此，它們是用于研究病毒進入宿主細胞的天然病毒體的極好替代品。在成功進入并感染靶細胞后，熒光素酶報告分子被整合到宿主細胞的基因組中并被表達。轉(zhuǎn)導的細胞可以通過簡單的熒光素酶分析容易地定量。這種方法的一個重要優(yōu)點是可以在生物安全二級(BSL-2)設施中實施，而不是像中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)和嚴重急性冠狀病毒那樣的高致病性冠狀病毒所需的BSL-3設施。另一個優(yōu)點是它的多功能性，因為它可以應用于屬于所有三種病毒融合蛋白的包膜蛋白，如流感血凝素(HA)和埃博拉病毒糖蛋白(GP)、塞姆利基森林病毒E1蛋白或水泡性口炎病毒G糖蛋白。這種方法的局限性在于，只能概括所研究的包膜蛋白介導的病毒入侵。為了研究其他病毒生命周期步驟，需要其他方法。